中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1182.2-2004
Haemagglutination-inhibition test for avian influenza
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为风范性财录.本标准业国家认证认可业警管理委员会提业并扫口 本标准配革单位：中华人民共和国乘海出人境检验检疫局，本标准主要起草人：徐海亚、薛最山、潘文波、享秀云、周思波、王小玉.本标准基首次发布的出人境检验检疫行业标准，
禽流感微量红细胞凝集抑制试验
1范图
本标准提定了用张量红组胞减集抑制试验检测禽流感抗体的试验方法.本际准通用于武买商感检疫、疫情监图和流行病学调查.
2试剂和材料
2.1试剂
化学试剂均为分析线
2.2pl7 2.0. 1mel/L 确酸签握冲液(PBS)
配制方法见附录A.
2.3红胞
配制方肤见附录A
将鸡红组胞用PBS转释或1%意否液.
2.41%鸡红纸胞是浮渣
2.5标准抗净
流感HS.HT.H9等标车抗原
2.6标准血清
流感HS.H7、H9等标维阳性血济和标准用性血源，
2.7被检血液
2.7.1无菌采取动物盘液、凝题阶高心分高血请，置于4℃或一20C保存备用.
2.7.2除鸡外其余案的血请用光确定是否存在非特异性减集，有特异性登集的血清按下列方出进行 处理每 0. 5 mLa清 25 pL 红年的润缺% -B显 30 min.2 000 r/min其心 2 mia~3 mn.L细图区聚，取出吸附过的血请供检.
2.8器村
架盘天平、分析天平、离心机，V墅缴量血提板，微型预荡器，可调移液器、恒握箱等，
3膜作方法
3.1数量血凝试验
做量血碳试验见表！，
表1 武沈球微量自凝试验
7 2 3 3 4 5 7 3 9 6 19 I1 对R 12PBS/FL 25F 257 25′] tsJ 25] SJ 21′ fsz 2s 25] zsJ 25] 251%海组8/AL FBS/L 15 s2 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 26 25 25 25 25 23 25 25 25 25 2% 21 52时间及 的20）下静置mis左宅*(-
3.1.1在V微量血限板上.每孔人PHS2L
在3.须次类推作等量借比矫释至孔11.孔11实去25pL，礼12不加抗逐设立为红细胞对用，
3.1.3每孔人 PBS 25 μL
3.1.4每在加人1%红相险量浮班25p.2即置量型握嘉都上高或手持北泵版殊得面课年.
3. 1.5室星（龄 20C)下静置40 min左右：如景室温太高 可在4℃静置均60 mis 对黑红细胞是明显 的握点状时进行杭原新价判定，完全业减的抗原最高餐帮度为该抗原的血概教价，即一个应提单位(HAU)
3.1.64HAU抗原的标定
3.1.6.1根塞3.1.5测定的抗原的血凝效价-计其4HAU抗原的稀帮倍数.州题表1批原致价为
3. 1.6.2特25 p1. 含 4HAU 的权原用PBS他等量倍比属静，使母孔(2I μL)含有2 HAU 1 HAU 0 5 HAU 0 25 HAU 每礼补加 PBS 25 p1. 弄加人 1%鸡红组胞 25 yL-判定血限图像与期结暴是 否相排 2 HAU、1HAU在红细胞应也观究全酯集.0.5 HAU孔红组惠定出成50%凝基0 25HAU孔红理胞应不减集，若与此不并，应重新配制航取，测定效价，
3.2量自择制试款
微量血提押制试验见表2.
表2流感量血装际制试验
1 19 1 L2立理界度（ng) r 3 4 8 19 18 L2PUS/aL sz sz L e2 L4 3A17 抗斯/vL 2 25 25 225 5 22 5 21 25 25宝国的 2/)下鲁量显乡 30 min州对间服度 =--[ 董星(约2/)下静置分40 mis
3.2.1在V型微量血减板上-每礼加入 PBS 25 pL
3.2.2孔1加人披检盘待25xL.作等量比释至孔12.
3.2.3每孔加人 4HAU 的批原 25pL混匀.
3.2.4室鼠（片 20℃1下静置至少 30 nin.成4静置60 min
可在4℃静置约60min，待对照红细量显明显的圆点优时判定继果.
3.2.6每皮测定应设巴知满度的附性血清.阴检血情和红增胞对照（仅含25pL1%鸡红源胞和59p1 PBS)
3.2.7果判定
3.2.7.1红组胸均匀分航在孔庭同图、领斜血题板时不流换判为完全凝集，记作：755%凝集记作：50%复集记：25%集记作：红细胞集中在礼中央显器点、颁科血疑板时饿病判定 为不复集或盘影抑别记作一.
SN/T 1182.22104
3.2.7.2检查各种对照，别性血请该定<2（1：4），阳性血清诞疫不超过一个资度，红婚胞对照无自 凝或象，试验藏立进行结果气定.3.2.7.3能光全押制4HAU抗原的盘请最商得释度判为该血清的血限抑制滴度. 3.2.7.4血的血能抑别镇实2（116）.判为阳性.
