C53 ICS 67.050
SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T2521-2018代替SN/T2521-2010
单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法 SerotypingofListeriamonocytogenes
2018-03-12发布2018-10-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
SN/T2521-2018
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。
本标准代替SN/T2521一2010《单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法》。
本标准与SN/T2521一2010相比,主要技术变化如下: ,中, 修订了“5方法提要”的表述方式; 修订了“图1单核细胞增生李斯特氏菌血清分型流程图”; 将原标准中出现的 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国北京出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:曾静、魏海燕、张西萌、汪琦、马丹、魏咏新、赵晓娟、刘莉、李丹、 付溥博、徐蕾蕊。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为: SN/T2521-2010。
SN/T 2521-2018
单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法
1范围 本标准规定了单核细胞增生李斯特氏菌的血清分型方法。
本标准适用于对单核细胞增生李斯特氏菌进行血清分型。
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本 文件。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括的修改单)适用于本文件。
GB4789.30食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验 GB19489实验室生物安全通用要求 3仪器和材料 3.1台式离心机:1600g。
3.2冰箱:4℃~6℃。
3.3麦氏温度计。
3.4加热器。
3.5接种针。
3.6试管:6mm×50mm。
3.7试管架:适用于6mm×50mm试管。
3.8移液器:适用于25μL,50μL,100μL。
3.9恒温水浴:48℃。
3.10无菌载玻片。
3.11生物安全柜。
4培养基和试剂 4.1SIM动力培养基:见A.1。
4.2胰蛋白磷酸盐肉汤(TPB):见A.2。
4.337%甲醛溶液。
4.40.85%灭菌生理盐水:见A.3。
4.5含0.5%甲醛的生理盐水:见A.4。
4.60抗血清。
4.7 H抗血清。
5方法提要
SN:T2521-2018 待测菌株 H抗原的鉴定 O抗原的鉴定 挑取菌苔边缘穿刺接种SIM动力培挑取菌苔中心
养基(24h~48h,25℃) 接种TPB液体培养基接种TPB液体培养基 ↑ 25°C,培养18h~24h35℃,培养18h~24h ↑ 加入37%甲醛溶液,100℃,加热菌体细胞 使甲醛终浓度达0.5%悬液2h 25℃,保温4h
1600g离心30min,收 1600g离心30min,收集菌体 集菌体
用TPB液体培养基或 用0.5%的甲醛生理盐0.5%的甲醛生理盐水 水洗涤菌体细胞洗涤菌体细胞 1600g离心30min,收1600g离心30min,收 集菌体集菌体 ↑ 用0.5%甲醛生理盐水用0.5%甲醛生理盐水 重悬菌体细胞重悬菌体细胞 调整细胞浓度≥3个麦调整细胞浓度≥3个麦 氏单位氏单位 ← 血清型鉴定血清型鉴定 图1单核细胞增生李斯特氏菌血清分型流程图
7单核细胞增生李斯特氏菌血清分型方法
7.1H抗原鉴定 7.1.1将活化的待测菌株用接种针垂直穿刺接种于SIM动力培养基(4.1),25℃,培养24h~48h。
典 型的单核细胞增生李斯特氏菌在SIM动力培养基上呈伞状生长。
7.1.2挑取生长在SIM动力培养基伞状菌苔边缘,接种于TPB(4.2)液体培养基,25℃,培养 18 h ~ 24 h. 7.1.3在TPB培养液中加人37%甲醛溶液(4.3),使甲醛的终浓度为0.5%[在8mL的培养液中加入 0.04mL的37%甲醛溶液(4.3)],25℃处理菌体细胞4h。
7.1.4离心收集菌体,1600g,离心30mino
m
SN/T2521-2018 7.1.5重悬菌体细胞于含0.5%甲醛生理盐水(4.5)中,调整菌体细胞浓度≥3个麦氏单位,该菌悬液 为标准菌悬液;也可以用经甲醛处理的单核细胞增生李斯特氏菌TPB菌悬液进行H抗原凝集反应,其 凝集反应结果应与用0.5%甲醛生理盐水(4.5)洗涤的标准菌悬液相同。
7.1.6在6mmx50mm试管中分别加人100μL经稀释的H抗血清(4.7),A,B,C,D,与等体积经 甲醛处理的菌悬液充分混匀,同时用0.85%灭菌生理盐水(4.4)代替抗血清作为阴性对照,48℃水浴 保温1...