中华人民共和国国家标准
GB 4789.30-2025
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
菌检验》.
本标准与GB4789.30-2016相比，主要变化如下：
修改了适用范围；修改了培养基和试剂，增加了OA李斯特氏菌显色培养基配方：修改了第一法单核细胞增生李斯特氏菌定性检验增菌液、选择性培养基、检验程序、鉴定方法等：修改了第二法单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法的样品接种、菌落计数和确认、结果计 数、结果报告：修改了第三法单核细胞增生李斯特氏菌MPN计数法的样品接种.
食品安全国家标准
单核细胞增生李斯特氏菌检验 食品微生物学检验
1范围
本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes）的检验方法.
斯特氏菌含量较高的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的计数；第三法适用于单核细胞增生李斯特氏菌含量较低的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的计数.
2设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下.2.1冰箱：2C~8℃2.2恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃、25℃~30℃.2.3均质器.2.5电子天平：感量为0.1g、0.1mg- 2.4显微镜：100×~1000×.2.6锥形瓶：100mL.500mL.2.7无菌吸管：1 mL（具o.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或移液器（量程为0.1mL、1mL、10mL）及无菌吸头.2.8无菌培养Ⅲ；直径90mm.2.10离心机：4 000 r/min. 2.9无菌试管：16mm×160mm.2.11无菌离心管：30mm×100mm.2.12无菌注射器：1mL.2.13油镜或相差显微镜.2.15单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenex）ATCC19111或CMCC 54004或其他等效 2.14无菌涂布棒.菌株.2.16英诺克李斯特氏菌（Listeria inmocua）ATCC33090或其他等效菌株.2.17伊氏李斯特氏菌（Listeriaianoii）ATCC19119或其他等效菌株.2.18斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri）ATCC 35967或其他等效菌株.2.19金黄色葡萄球菌（Staphylococcas aureus）ATCC25923或其他等效菌株，要求产g-溶血环.2.20马红球菌（Rhodococcaux equi）ATCC 6939 或 NCTC 1621或其他等效菌株. 2.21小鼠：ICR品系，体重18g~22g.
GB 4789.30-2025
2.22微生物生化鉴定系统.2.23无菌过滤装置，
3培养基和试剂
3.1含0.6%酵母膏粉的胰酪陈大豆肉汤（TSB-YE)：见附录A中A.1.3.2含0.6%酵母膏粉的胰酪陈大豆琼脂（TSA-YE）：见A.2.3.3Fraser 增菌肉汤（FB、FB;）：见A.3.3.4OA李斯特氏菌显色培养基：见A.4.3.5PALCAM培养基：见A.5.3.6革兰氏染色液：见A.6.3.8缓冲葡萄糖蛋白陈水[甲基红（MR）和乙酰甲基醇（VP）试验用]：见A.8. 3.7SIM动力培养基：见A.7.3.9羊血琼脂：见A.9.3.10无菌磷酸盐缓冲液：见A.10.3.11无菌生理盐水：见A.11.3.13过氧化氢试剂：见A.13. 3.12糖发酵管：见A.12.3.14微生物生化鉴定试剂盒.
第一法单核细胞增生李斯特氏菌定性检验
4检验程序
单核细胞增生李斯特氏菌定性检验程序见图1.
图1单核细胞增生李斯特氏菌定性检验程序
5操作步骤
5.1增菌
以无菌操作取25g（mL）样品，置于盛有225mLFB增菌肉汤的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，或放人盛有225mLFB，增菌肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1：10的样品匀液.若样品为液态，也可采用振荡或搅拌混匀.于30C士1℃培养24h士2h.混匀，吸取0.1mLFB增菌肉汤，转种于10mLFB:增菌肉汤内.于30℃士1C培 养24 h±2 h.
5.2分离
取混匀后的FB：增菌肉汤，分别接种于OA李斯特氏菌显色培养基（或其他等效李斯特氏菌显色培养基）平板和PALCAM培养基平板，36C士1℃培养24h~48h，观察各个平板上生长的菌落.典
