中华人民共和国国家标准
GB 15193.29-2020
食品安全国家标准 扩展一代生殖毒性试验
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准 扩展一代生殖毒性试验
1范围
本标准规定了扩展一代生殖毒性的基本试验方法和技术要求. 本标准适用于评价受试物的生殖发育毒性作用.
2术语和定义
2.1生殖毒性
可发生于妊前期和哺乳期，表现为外源化学物对生殖过程的影响，如生殖器官及内分泌系统的变化，对 对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响.生殖毒性既可发生于雌性妊娠期，也性周期和性行为的影响，以及对生育力和妊娠结局的影响等.
2.2发育毒性
个体在出生前暴露于受试物、发育成为成体之前（包括胚期、胎期以及出生后）出现的有害效应，表现为发育生物体的结构异常、生长改变、功能缺陷和死亡.
2.3神经发育毒性
个体在发育过程中暴露于受试物后引起的神经系统结构和功能的异常改变，这种改变可以发生在生命周期的任何阶段.
2.4发育免疫毒性
功能出现障码，面这些影咱在成年个体暴露时未被发现或持续时间较短. 个体在其生命早期发育过程中（尤其是出生前后）暴露于受试物后导致的免疫系统发育受到影响、
2.5每体毒性
甚至死亡等. 受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，
2.6未观察到有害作用剂量
通过动物试验，以现有的技术手段和检测指标未观察到任何与受试物有关的毒性作用的最大剂量.
2.7最小观察到有害作用剂量
在规定的条件下，受试物引起实验动物组织形态、功能、生长发育等有害效应的最小作用剂量.
3试验目的
本试验用于评价受试物对亲代（F0代）及子代（F1代等）实验动物生殖和发育的影响.提供关于受
试物对亲代雄、雌性动物生殖系统完整性和功能，如性腺功能、发情周期、附睾精子成熟、交配行为、受孕、妊娠、分娩和哺乳等影响的信息，同时获得受试物对子代动物的生长、发育，包括性成熟、生殖器官完整性和功能，神经发育以及免疫发育等作用的资料.
4试验方法
4.1受试物
受试物应首先考虑使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理.将受试物掺人饲料、饮用水或淮胃给予，
4.2实验动物
4.2.1动物选择
实验动物的选择应符合GB14922.1和GB14922.2的有关规定.选择已有资料证明对受试物敏感的动物物种和品系，一般啮齿类动物首选大鼠，避免选用生殖率低或发育缺陷发生率高的品系.本标准别的动物均应使用.所选动物应注明物种、品系、性别、体重和周龄.同性别实验动物个体间体重相差 中的原则和建议均是以大鼠为基础的.为了正确地评价受试物对动物生殖和发育能力的影响，两种性不超过平均体重的土20%.选用的亲代实验动物试验开始时需性成熟，至交配时需日龄相近（大鼠至少为13周龄），而且其中雌性动物应为非经产、非孕动物.
4.2.2实验动物数量
为了获得具有统计学要求的基本试验数据，正确地评价受试物对动物生殖和发育过程（包括F0代动物生殖、妊娠和哺育的过程，F1代动物从出生到成熟过程中的生长发育情况）的毒性作用，需保证受试物每个剂量组和对照组均至少获得20只孕鼠.一般在试验开始时，建议每组两种性别亲代（F0代）大鼠各准备30只左右.
4.2.3动物准备
试验前动物在实验动物房至少应进行3d~5d的环境适应和检疫观察.
4.2.4动物饲养环境
实验动物何养条件、饮用水、何料应符合GB14925、GB5749、GB14924的有关规定.实验动物单笼或按性别分笼饲养，自由饮食、饮水.孕鼠临近分娩时，应单独饲养在分娩笼中，需要时笼中放置合适的造窝垫料.
4.3剂量及分组
动物按体重随机分组至少设3个受试物剂量组和1个对照组.如果受试物使用溶剂，对照组应给予溶剂的最大使用量.某些受试物的高剂量受试物组设计应考虑其对营养素平衡的影响，对于非营养成分受试物剂量不应超过饲料的5%.
在受试物理化和生物特性允许的条件下，最高剂量应使F0和F1代动物出现明显的毒性反应，但不引起动物死亡；中间剂量可引起轻微的毒性反应：低剂量应不引起任何毒性反应.剂量组间距以2倍或4倍为最佳.
4.4受试物给予
4.4.1根据受试物的特性或试验目的，可将受试物掺人饲料、饮水或灌胃给予实验动物，首选掺人饲
料，若受试物加人饲料或饮水中影响动物的适口性则考虑选择滥胃给予.
4.4.2试验期间，动物应采用相同的方式给予受试物：如受试物经灌胃给予，每天一次，各代大鼠给予的受试物剂量、饲料和饮水相同.
4.4.3受试物掺人饲料或饮水给予，要将受试物与饲料（或饮水）充分混匀并保证该受试物配制的稳 定性和均一性，以不影响动物摄食、营养平衡和饮水量为原则，受试物掺人何料比例一般小于质量分数5%，若超过5%（最大不应超过10%），调整对照组饲料营养素水平，若受试物无热量或营养成分，且添加比例大于5%时，对照组饲料应填充甲基纤维素等，掺人量等同高剂量，使其与剂量组饲料营组何料营养素水平保持一致.受试物剂量单位是每千克体重所摄人受试物的毫克（或克）数，即 养素水平保持一致：亦可视受试物热量或营养成分的状况调整剂量组饲料营养素水平，使其与对照mg/kg体重（或g/kg体重），当受试物掺人何料，其剂量单位亦可表示为mg/kg（或g/kg）饲料，掺人饮水则表示为mg/mL水.受试物掺人饲料时，需将受试物剂量（mg/kg体重）按动物每100g体重的摄食量折算为受试物伺料含量（mg/kg饲料）.扩展一代生殖毒性试验大鼠每日摄食量一般可按体重的8%折算.
4.4.4受试物选择激胃方式给予时，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中，建议优先考虑使用水溶液或悬浮液，其次考虑使用植物油（如橄榄油、玉米油等）溶液或悬浮液，不溶于水或油的受试物亦可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混悬液或痫状物等.溶媒或其他的添加剂增强受试物溶解性应考虑以下特点：是否影响受试物的吸收、分布、代谢和蓄留；是否影响受试物的化学特性，以致改变其毒性特征；是否影响动物食物和水的消耗量并影响动物的营养水平.另外，除水外必须清楚溶剂的毒性特征，避免使 用原本具有潜在毒性的溶剂（如丙酮、二甲基亚砜）.受试物应现用现配，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外.
4.4.5受试物以灌胃方式给予，如溶媒为水溶液时，灌胃体积一般不超过10mL/kg体重，最大潍胃体积不超过20mL/kg体重：如为油性液体，胃体积应不超过4mL/kg体重：各组灌胃体积均应一致. 应每日在同一时间灌胃1次，每周至少称体重2次，根据体重调整灌胃体积.在分娩当天建议不对母鼠进行潍胃或采取其他处理措施.
4.5试验方法
代雌、雄性大鼠采用的处理方式均应相同，每天给予受试物，期限从交配前2周开始并涵盖交配期、妊娠 推荐选用10周龄以上的雌、雄性大鼠作为F0代，至少适应3d~5d后开始给予受试物.各组F0期直到F1代断乳的整个试验期间，F1代断乳后，可对F0代雌、雄性大鼠进行大体解剖和生殖指标等各组断乳后的F1代雌、雄仔鼠，根据检测目的随机分配至该组各评价队列中，并给予受试物直到相应队列指标完成检测.各评价队列的测定指标的检测时间、使用动物的数量及检测内容等见表1和表2.
相 检4天，完成 指发 有生 殖 生关给予受试物，如1A 组发现生殖毒性作 （) 可行制检验证或到 02日06 日龄）后继续交配进 交配（给予受试物） 妊娠期给子受试物 哺乳期给予受试物， 哺乳期第4天结束 试验，处死雌、维鼠行验证达给予受试物，进行发育免疫毒性评价8出生后第21天或第 2天，处死，记录脑 重并行神经组织病理学检查2给予受试物，进行神 经发育毒性评价：结 束后处死，记录脑重 并行神经组织病理组学检查1A 组 给予受试 生殖发育 毒性评价其他处理，可处死雌 鼠：雄鼠给子受试物 满足不少于10周，处死01第~8第 半前0℃集~W11集 第26周~试验结束（必要时） （必要时） （必要时）
展一代生殖毒性试验程序扩展表1
