中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1202-2003
Protocol of the qualitative polymerase chain reaction for detectinggenetically modified plant ponents in food
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前 言
本都准自国家认证认可监督管理委员会握出并归口.本标准起草单位：中华人民共科国广州出入现检验验疫局，中国进出口海品检验批本研究所. 本都准主要起草人：罩文、董清、邓腾铃、吴宏中、徐宝聚，本标准系首次发布约检验检疫行业标准，
食品中转基因植物成分定性PCR检测方法
1范图
本标有规定了食品中装基因植物成分的定性PCR检刻方法.
本标适用于由转基四大里（RounduReady）、王来（B174，B11.Mom810.T14/T2s GA21.种原料加工至成验食品成品和食品服加烈中特基四或分的检列，
2规范性引用交件
下列文件中的表款通过本标准的引用限成为本标座的条款，凡是性目期的引用文件，其随后的修改单（不包担着误的内容）或修订版均不通用于本标准，然西，款助根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这数文件的最新版本，凡是不性日期的引用文件，其最新新本道用于本标准，
GB/T6682分析实验室用水提格和试盈方法（eqvISO3696；1987）SN/T1193基四检验实验室术要求 SN/T1194核物及其产品转基因或分检美拍种和制种方这SN/T1195大豆中转基因或分定性PCR检黄方张 SN/T1196玉米中转基齿或分定性FCR检美方法SN/T1197鹏菜籽转基因成分定性PCR检方张 SN/T1199智花中精基送成分定性PCR检高方法SN/T1204推物及其加工产品中转基因成分实时资光PCR定性检验方法
下列呢略语造用于本标准：
3.1 PCR:polymeraae chain reaction 简称 PCR 3.2DNA deoxyribonectie etid-B家机物长R.3.3dNTP，deoxyriboeucieoside triphosphate 般氧核甘三银胺. 3. 4 dATP deoxyadenosine tripbssphate-机B食三婧般 3.5 dCTP，deoxyeytidine tripbosphate.E联腺量三调&. 3.6dGTP:deosyguanosine triphoaphate.股氧乌世三确股 3. 7dUTP;deoxyuridine triphoapate RRU度哲三确股 3.8 bp:bese peir.城基对.3. 10Tris;tris (bydroxymethyl) aminomethane 三(短甲基)批基甲能. 3.9Teg 别:DNA 聚国.3. 12Leetin，植物发集系. 3.11TE TrirC EDTA 级R.1.13ZEIN，植物蛋白3. 14PE3-PEPoase;phosphoenilpgruvate-carboxylase 确级细醇式所航数级化腺 1.15Peratin.马性块塞扩藏蛋白Psttin基因片我，具有马著种属特异性.
SN/T
3.18CaMV35S.35Spromerfromcllower mossit virus.自于北得菜花叶病毒的35S启动子.3.20 FMV 35S 35S yemoer from 4 modified fgwont mosic virs (ceelimovires group) 参花 3. 19NOS terminator of nopline synchase gene 器脂城合成脂基因终止子.我卷355启动子. 3.21NPT1l:neotmyrin3′-phophotransforase gent-数等家-3'确级特移别基围 3.22 BAR; phosphinothririn acetyltrnsfersse gme fom Bacilla amyloliqurfeciens 8 于 出 Bscillsemyiqferi草丁乙能特够防基因.3. 25 CrylA Cb) a synthetic gene enoodea tha lirst 648 amino atids insecticidal-active ftruncesedgroduet identical to that of erylA(b) gese of Beeilisr hwringiresis subp 苏云金芽孢杆国杀虫靠蛋 自orylA（6）基因.3.26 Cry3A8 thringiemris subsp Tenebrieni (8 L c ) strsin B} 2S6-82 抗S等强白 -滤择性 董承 科罗拉多马价要甲盘（Colorado poteto beetle larrae).
3.16tRNALeu植物叶绿体基园，
3.1718SrRNA，真核生物18S被糖体RNA基四.
3.23PAT hophritin aotylera ge，丁牌乙显移照因.
3.24GOX.gphote oxidnductas gro，草氧化还原基因.
3. 27 EPSPS:5-enolpyruvyishikimate-3-phosphate syethase gene 5-募草酸-3-确股合成族基因
3.28PVY-cppotatoY vis eoat prorin，马神著Y病毒外壳蛋白.
3.29PG：poglaturonse.多聚半乳酸.
4防污染措施
食品中转基因成分检验过程时防受指施应街合SN/T1193的规定.
5排得与
6润定方法
6.1期理
特异性扩增外都基因的DNA芳新，板据PCR扩增结果，判新谈食品中是否含有转基因成分.
5.2主要仪器
6.2.2DNA美序仪. 6.2.1PCK热编F仅.6.2.4电泳仪. 6.2.3邮净工作台，6.2.6消毒天美销.6.2.7核酸蛋白分析仅. 6.2.8高速冷离心机，白式小显高心机，Mini个人离心机，6.2.9低温冰箱.冷藏冷冻冰霜5.2.11M冰机 6.2.12旋乘病龄，
6.2.5腔成律系统.
6.2.10水器.双落水器.
6.2.13可铁，可高湿灭图的拆即式器排粉碎机，研体.
6.2.14电子天平.
6.2.15智培养前，恒解育.
6.2. 16鲁量移R器;0. 5 μL 2 pL 10 μ 20 μL 100 μL.200 μL 1 000 xL
6.3主需试剂
除另有我定外.试别均为分析境成生化试列.
6.3.1实骏用水应符合GB/T6682中一级水的氢格，
6.3.2指精.
E.3.33asc酶溶液，20单位/mg冻千晶，用销毒过的去离子水或双蒸水溶解RNAr人辨：度为 10/L-分后于-20℃保存，通免反复购，
6.3. 4 CTAB 提取8:CTAB 20 g/L 化纳 1. 4 mol/L Tris 0.1 mol/L Na EDTA0 02 mol/L-用盐 成氢氧化纳调节pH至8.0.
6.3.5CTAB抗度液：CTAB 5 g/L 航化的0 04 mol/L
6.3.6化销等获氯化明1.2=ol/L
6.3.7蛋白K溶，蛋白酶K20mg/ml.指于指毒水，不要高压损毒，储存于一20℃，通免反发
6.3.8提体：非特基明、非民一物种的管成动物基因组DNA，
6.3.11基因组DNA提家试剂点.
6.3.12PCR试N盒：含有Mg**的PCR.4ATP 4TTP dCTP.dGTP、Te.
食品精基因植物成分检测内图基因和分外图基因医用的引物序列见表1，以玉米和油菜籽为原新加工的食品中其值外原日的基器检测引物序列见SN/T11962003和5N/T1197-2003
表1检测食品中内源基四和肆分外源基四的引物序列
松型基 PCR产物大小/bg] 基性质Lectin E:5-gerwatenetesne-3 K:1-gnasogaagoctmgtg-3 118 大豆 以大至为原料加工的食品E:5°- cteotcgnaaga-3 B.1asgngmgrgeg-2 152 内原基IVR E.Fogrgtmacaxstguce-? :5apgogeapgotpcgne] 226 内原基因 联王承为原料加工房食品NRZ Eltgaceorgetgoagp-3 B:5-agaguorrggtp-? 193Paratis 反：gpmogpp? E5gicgocamgt3 216 内原基园 以马钟要为原购加工的食品PE-PPase latcoppmp-3 B:5”-ggevogteoastgaga-3" 131 内基国 以单级为原科加工的盘品@NALe :5cpangaggng-2 :4'-soeggitotgot-3 180 叶绿体 以地物为意加工出食品
