中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T
Protocol of the real-time PCR for detecting genetically modified plants and their derived products
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准由国家认证认可监督管理费员会损出并街口，
本标准由中华人民共和国质能置警检验检疫总局动植物检疫实验所、中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国江宁出人境检验检疫局、中华人民共和国际圳出人境检验检疫局，中华人 民共和国上寿出人捷险验检疫局负贵起享.
本标准主受起单人：东水劳、原文、曹际始、章核明、播良文、黄文胜、陈红运.
本标准系首次发布的检验检疫行业标准，
植物及其加工产品中转基因成分 实时荧光PCR定性检验方法
1
PCR定性检验或者其他检验方法检测继果为阳性的确证实验. 本标难运用于玉术、大豆、链浆籽、马价著、香菇、推花、烟车及其加工产品中转基因成分实时荧光
2范性型用文件
的修改单（不包折肤读的内容）或修订载均不适用于本标准，些买，放除根据本标车达成价议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用买成为本标座的条款，凡是注日期的引用文件.其随应是否可使用这叁文件的最新原本，凡是不挂日期的引用文件，其鱼新账本逼用于本标准，
GB/T662分折实验室用水成和实验方法SN/T1194桂物及其产品中转基因成分检测技群和制样方法 SN/T1193基器检验实验室技术要求
3略语
下列端联墙适用于本标准.
3.2C值：C.cye.threoeid，每个反应管内持变光售号到选设定的城值时版经历的疆环数， 3. 1 AmpErase UNG Bf :ursril N-ghycosylane 3. 3 IPC:imternal positive control 内步. 3. 4NTC.sa template eontral S自arM 3.6DNAdeoxyrionueleic aid.长氧核榜核胶 3. 5PCR:polymeram chain sraction 降称 PCR 3. 7dNTPdeoxyribanucleoside triphosphate 级氧被曹三确能 3. 9dCTP;deoxycytidine trighoaphase 服氧脂售三确服 3. 10aGTP deoxyguanosite triphosghate.股乌管三磷胶3. 11dUTP deoxyuridine triphosphate.服我家督三调股. 3. 12 bp:bese pair.基对3.13Tem.DNA聚合酶 3. 14Tris uris（hydroxymethyl) aminomethae，三(短甲基）氢基甲统.3. 15 TE Tris-C1 EDTA 净波 3.16Lectin相物集素.3.17ZEIN值物醇蛋白. 3. 18PE3-PEPessehospbonilpyruxate-rboxylese.确股财据式丙期股脱化弱3.19tRNALeu植物叶绿体高因.
3.2018rRNA：真核生物15核糖体RNA盖.
3.21CaMV 35S358promoier from cwliflowermosic virus.来自于花排能花叶病毒的35S盘确子.3.22NOS:terminstor ofnopaline synthese geme.医期械合成基因业子.
3. 23FMVass 35S gromoter from s modified figwort mosaic virus(ceslimovires group) 套鲁&
靠3SS扇动子.
3.24NPTllneomycin-3-phosphotrenxferase gene.第素-3’-确转移基因
3. 25 BAR: phosphinothricin aoetylsrsnaferse gene Irom Beriiar emyloliqurfaciemu 来邯 于F WBecillasemyinliqwefeciens慕T牌乙M转移期基四.
3. 26PATphophinatricin acetyltrunaferes gone、邯丁乙R转移m基N.
3.27GOXglyphosane oxidoreductese gtne，甘瞬氧化还距照基因
3. 28 CrylA (b)a synthetic gene encodes the first 448 amino acids.insecticidal-active' ftruncatedprodaet identical to thet of crylA(6) gene of Bacias sharingieenir sehsp 苏云金芽孢齿录虫番蛋 白cryA（）基因，
3. 29 Cry3A:B sAaringiensir subsp.Texebriomis(B. ss. ) strain BI 254-82 抗或要蛋白-选排性得承 科岁拉多马州省甲虫(Colorado potato beetle larvse)
3. 30EPSPS 3-enolpyruvylshikimate3phoaghate yathase gne 5-苏年级-3-司缴合成册基国
4防污染
物及其加工产品中转基因成分实时觉光PCR定性检验过程的防污录指理应符合SN/T1183的规定.
祖物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验授洲SN/T1194航定的方世执行.
6实验方法
6.1原理
PCR进程，最后通过标难曲线对未知模板进行定量分析的方法. 实时发先定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加人费光备团，利用费先保号积累实时监测整个
标记一个张告费光基团机一个屏灭费光基国，探计完整时，张告基机发树的安光信号额择灭基偿吸收：PCR扩增时.Tag酶的5编3增外切酶活性将据针路如降解，使孩告荧光著团和萍叉费光团分高，从的累积与PCR产物形就完全网步.
6.2主美收者
6.2.2超净工作台. 6.2.1实时类光定量PCR仅6.2.3消毒天辆.6.2.8纯水器.双水器.6.2.9旋病美实费.
6.2.4别冰长.
6.2.5核融量白分析仪，
6.2.6高速珍冻离心机，台式小型离心机，Mimi个人离心机，
6.2.7低短冰格，冷藏冷冻冰脂.
6. 2. 10 微量进样B;0. 5 μL 2 pL 10 pL. 20 μL 100 μL 200 xL 1 000 μL
6.2.11光化学PCR反应管，
6.3主要试剂
除另有理定外，试剂均采用分析纯减生化试列，
6.3.1实验用水.应将合GB/T6682中一级水的规格.6.3.2PCR级冲波. 6.3.3 氧化模（MgC）.6. 3.4 dNTPs(dATP dUTP dCTP dGTP) 6.3.5 UNG (Uracil N-glycosylese) 6.3.6 6.3.7 Tec.
植物及其加工产品中转基因成分实时荧元PCR检测所用引物和握针序列完表1.
1实时费光PCR买验所用引物和探针序列
1'-gascewgatgcag-° 引物序 东米及美加工产品 近用花签ZEIN 5′-ggoagsggtga-3′ 5”’geargccgiengig?” （医基因）Letin 5'staugrgsg’ 5"oggg3 大其工产路 （内基因）PD-PEPux '-oggcm-3 5′gccarstgo-3” 5'-ggtatgstgcgepe-3’ 曲莱料及其加工产品 （A基因）RNALae 5'-ogeategengngonecg-1’ 5′-gccrtgagt”5′-oseartgagticstgcaas-8° 5′-gtgctgtt]5'ogogpg (A9M&E)CaMVSS 5'mgcgerepmngte3” 5'-tgocgngang-3 香座、马特著及其加工产品NOS 5'-ngeetggn-3 5′wgrgritatct3’ 5'-gc 著因大区、五米、睡宽杆、 香座、马特及其加工产品FMV3SS 5'gicaeningagem-? 和的花（标）丑其加工5'ggnteingingigeco3NPTI Vwgpa 5'-gxcpigougiggee-° 5′-acgeasga3’ 联及其加工产品Bsr 5′-coggcgoaguccgcagpug-3′ IFBPAT 5'pgengutogpet 特基因大亚，五米、始豪 天英加工产品SOX 5'gttgga3° 5′-ggtcgg-3 工*B5'-paeggrgggpg!
