GB/T 5537-2008
前言
本标准的第一法参考了美国油脂化学协会AOCSOfficialMethodCa12-55（磷）（英文版）。
本标准代替GB/T5537-1985植物油脂检验磷脂测定法》。
本标准与GB/T5537-1985的主要技术差异为： 标准名称由《植物油脂检验磷脂测定法》改为《粮油检验磷脂含量的测定》： 修改了标准储备液制备中磷酸二氢钾的称样量； 修改了比色Ⅲ的规格； 一修改了空白调零时使用的试样； 修改了制备被测液时称样量： 一修改了结果计算的方式。
本标准国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：中粮北海粮油工业（天津）有限公司。
本标准主要起草人：郝克非、李学红。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T 5537-1985。
GB/T 5537-2008
粮油检验磷脂含量的测定
1范围 本标准规定了植物油脂中磷脂含量测定的术语和定义、原理、仅器和用具、试剂和溶液、操作步骤、 结果计算和重复性。
本标准适用于植物原油、脱胶油及成品油。
本标准第一法为钟裁法。
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T5524动植物油脂扦样 GB/T15687动植物油脂试样的制备 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。
3. 1 磷脂phosphatide 由甘油、脂肪酸、磷酸、氨基醇和环醇等构成的化合物。
第一法钼蓝比色法
4原理 植物油中的磷脂经灼烧成为五氧化二磷，被热盐酸变成磷酸，遇钼酸钠生成磷钼酸钠，用硫酸联氨 还原成钼蓝，用分光光度计在波长650nm，测定钼蓝的吸光度，与标准曲线比较，计算其含量。
5仪器和用具 5.1分光光度计：具1cm比色Ⅲ。
5.2分析天平：分度值0.0001g。
5.3马弗炉：可控制温度，主要使用温度在550C~600C. 5.4封闭电炉：可调温。
5.5沸水浴。
5.6瓷堆埚或石英坩埚：50mL、100mL能承受的最低温度600C。
5.7容量瓶：100 mL、500 mL、1 000 mL. 5.8移液管：1 mL、2 mL、5 mL,10 mL, 5.9比色管：50mL.
GB/T 5537-2008
6试剂和溶液 警告：使用本标准的人员应有正规实验室工作的实际经验，本标准并未指出可能的安全问题。
使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法律规定的条件。
所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
6.1盐酸：1.19g/mL。
6.2氧化锌。
6.3氢氧化钾。
6.4浓硫酸：1.84g/mL. 6.5钼酸钠。
6.6硫酸联氨。
6.7磷酸二氢钾：使用前在101C下干燥2h。
6.82.5%钼酸钠稀硫酸溶液：量取140mL浓硫酸（6.4）.注入到300mL水中。
冷却至室温，加人 12.5g钼酸钠-溶解后用水定容至500mL，充分摇匀，静置24h备用。
6.90.015%硫酸联氨溶液：将0.15g硫酸联氨（6.6）溶解在1L水中。
6.1050%氢氧化钾溶液：将50g氢氧化钾（6.3）溶解在50mL水中。
6.111：1盐酸溶液：将盐酸（6.1)溶解在等体积的水中。
6.12磷酸盐标准储备液：称取干燥的磷酸二氢钾（6.7）0.4387g，用水溶解并稀释定容至1000mL， 此溶液含磷0.1mg/mL。
6.13标准曲线用磷酸盐标准溶液：用移液管吸取标准储备液（6.12）10mL至100mL容量瓶中，加水 稀释并定容。
此溶液含磷0.01mg/mL。
7操作步骤 7.1扦样 按GB/T5524执行。
7.2试样的制备 按GB/T 15687执行。
7.3绘制标准曲线 取六支比色管（5.9），编成0、1、2、4、6、8六个号码。
按号码顺序分别注人标准溶液（6.13）0mL、 1 mL、2mL、4mL、6mL、8mL,再按顺序分别加水 10 mL9mL、8mL6mL、4 mL、2mL.接着向六 支比色管中分别加入硫酸联氨溶液（6.9）8mL，钼酸钠溶液（6.8）2mL.加塞，振摇3次~4次，去塞， 将比色管放人沸水浴（5.5）中加热10min，取出，冷却至室温。
用水稀释至刻度，充分摇匀，静置 10min。
移取该溶液至干燥、洁净的比色Ⅲ中.用分光光度计在650nm处，用试剂空白调整零点，分别 测定吸光度。
以吸光度为纵坐标，含磷量（0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg）为横坐标绘 制标准曲线。
7.4制备试液 根据试样的磷脂含量，用坩埚（5.6）称取制备好的试样（7.2），成品油试样称量10g，原油及脱胶油 称量3.0g~3.2g（精确至0.001g）。
加氧化锌（6.2）0.5g，先在电炉上缓慢加热至样品变稠，逐渐加 热至全部炭化，将坩埚送至550C~600C的马弗炉中灼烧至完全灰化（白色），时间约2h。
取出坩蜗 冷却至室温，用10mL盐酸溶液（6.11）溶解灰分并加热至微沸，5min后停止加热，待溶解液温度降至 室温，将溶解液过滤注人100mL容量瓶中，每次用大约5mL热水冲洗坩蜗和滤纸共3次～4次，待滤 液冷却到室温后。
用氢氧化钾溶液（6.10）中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸溶液（6.11）使氧化锌沉淀全 部溶解，再加2滴。
最后用水稀释定容至刻度，摇匀。
制备被测液时同时制备一份样品空白。
2
GB/T 5537-2008 7.5比色 用移液管吸取被测液（7.4）10mL，注人50mL比色管中。
加人硫酸联氨溶液（6.9）8mL，钼酸钠 溶液（6.8）2mL.加塞，振摇3次～4次，去塞，将比色管放人沸水浴中加热10min，取出，冷却至室温。
用水稀释至刻度，充分摇匀，静置10min。
移取该溶液至干燥、洁净的比色Ⅲ中，用分光光度计在 650nm下，用试样空白调整零点，测定其吸光度。
8结果计算 试样中磷脂含量按式（1)计算： V× 26. 31*( 1 ) 式中： X-磷脂含量，单位为毫克每克（mg/g）： P标准曲线查得的被测液的含磷量，单位为毫克（mg）; m试样质量.单位为克（g）； V样品灰化后稀释的体积，单位为毫升（mL）； V：比色时所取的被测液的体积，单位为毫升（mL）； 26.31每毫克磷相当于磷脂的毫克数。
当被测液的消光值大于0.8时，需适当减少吸取被测液的体积，以保证被测液的消光值在0.8 以下. 每份样品应平行测试两次，平行试样测定的结果符合精密度要求时，取其算术平均值作为结果，计 算结果保留小数点后三位。
9重复性 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
第二法重量法 10原理 植物油中的磷脂吸水膨胀，密度增大，使其由絮状悬浮物转变为沉淀物。
将试样水化后，用丙酮反 复洗涤过滤，由于磷脂不溶于丙酮，油溶于丙酮，从而可使得磷脂与油分离。
称量磷脂的质量，计算其含 量。
该方法所得到的沉淀过滤物不完全是磷脂，还有其他不溶于丙酮的类脂物质。
11仪器和用具 11.1玻璃漏斗、漏斗架。
11.2分析天平：分度值0.0001g。
11.3电烘箱：可控制在103C土2C。
11.4200mL烧杯. 11.5抽滤瓶。
11.6锥形瓶。
11.7定量滤纸。
12试剂 丙酮：分析纯。
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