中华人民共和国国家标准
GB/T6432-2018 代替GB/T6432-1994
Determination of crude protein in feeds-Kjeldahl method
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准代替GB/T6432-1994《饲料中粗蛋白测定方法》.本标准与GB/T6432-1994相比，除编辑性修改外，主要技术内容变化如下：修改了适用范围（见第1章）； 修改了标准名称（见封面）；增加了对计算结果有效数字的规定（见第8章）.本标准由全国何料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口.（北京）. 本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心本标准主要起草人：肖志明、樊霞、马东霞、李丽蓓、王石、贾、刘晓露、王志刚、刘军.本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
GB 6432-1986 GB/T 6432-1994.
饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法
1范围
本标准规定了测定何料中粗蛋白质的凯氏定氮法.本标准适用于何料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中粗蛋白质的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
试样在催化剂作用下，经硫酸消解，含氮化合物转化成硫酸铵，加碱蒸馏使氨选出，用硼酸吸收后，再用盐酸标准滴定溶液滴定，测出氮含量，乘以6.25，计算出粗蛋白质含量.
4试剂或材料
除非另有说明，仅使用分析纯试剂.
4.1水：GB/T6682，三级 4.2硼酸：化学纯.4.3氢氧化钠：化学纯.4.4硫酸：化学纯.4.5硫酸铵.4.7混合催化剂：称取0.4g五水硫酸铜、6.0g硫酸钾或硫酸钠，研磨混匀；或购买商品化的凯氏定氮 4.6蔗糖.催化剂片.4.8硼酸吸收液I：称取20g硼酸，用水溶解并稀释至1000mL.4.9硼酸吸收液Ⅱ：1%硼酸水溶液1000mL，加人0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1%甲基红乙醇 溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mL.混匀，室温保存期为1个月（全自动程序用）.4.10氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠，用水溶解，待冷却至室温后，用水稀释至100mL.4.11盐酸标准滴定溶液：c（HC1)=0.1mol/L或0.02mol/L.按GB/T601配制和标定.4.12甲基红乙醇溶液：称取0.1g甲基红，用乙醇溶解并稀释至100mL.4.13澳甲酚绿乙醇溶液：称取0.5g溴甲酚绿，用乙醇溶解并稀释至100mL. 4.14混合指示剂溶液：将甲基红乙醇溶液和溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合.该溶液室温避光保存，有
效期3个月，
5仪器设备
5.1分析天平：感量0.0001g.5.2消煮炉或电炉. 5.3凯氏烧瓶：250mL.5.4消煮管：250mL5.5凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式.5.6定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动定氮仪.
6样品
按照GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样.按照GB/T20195制备试样，粉碎，全部通过0.42mm试验筛，混匀，装人密闭容器中备用.
7试验步骤
7.1半微量法（仲裁法）
7.1.1试样消煮
7.1.1.1凯氏烧瓶消煮
中，加人6.4g混合催化剂混匀，加人12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上，开始于约 平行做两份试验.称取试样0.5g~2g（含氮量5mg~80mg，准确至0.0001g），置于凯氏烧瓶200C加热，待试样焦化、泡沫消失后，再提高温度至约400℃，直至呈透明的蓝绿色，然后继续加热至少2h.取出，冷却至室温.
7.1.1.2消煮管消煮
加人2片凯氏定氮催化剂片或6.4g混合催化剂，12mL硫酸，于420C消煮炉上消化1h.取出，冷却 平行做两份试验.称取试样0.5g~2g（含氮量5mg~80mg，准确至0.0001g），放人消煮管中，至室温.
7.1.2氨的蒸馏
样分解液.将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸人装有20mL硼酸吸收液I（4.8）和2滴混合指示剂 待试样消煮液冷却，加人20mL水，转人100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试（4.14）的锥形瓶中.蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂（4.12）数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸.准确移取试样分解液10mL～20mL注人蒸馏装置的反应室中，用少量水冲洗进样人口，塞好人口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液（4.10），小心提起玻璃塞使之流人反应室，将玻璃塞塞好，且在人口处加水密封，防止漏气.蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，至流出液pH值为中性.用水冲洗冷凝管末端洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏.
7.1.3滴定
将7.1.2蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准滴定溶液（4.11）滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为滴定终点，
7.2全量法
7.2.1试样消煮
按7.1.1步骤进行.
7.2.2氨的蒸馏
7.2.2.1待试样消煮液冷却，加人60mL～100mL蒸馏水，摇匀，冷却.将蒸馏装置的冷凝管末端浸人装有25mL硼酸吸收液I（4.8）和2滴混合指示剂（4.14）的锥形瓶中.然后小心地向凯氏烧瓶中加人 50mL氢氧化钠溶液（4.10），摇匀后加热蒸馏直至馏出液体积约为100mL.降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1min~2min，至流出液pH值为中性，用水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏.
7.2.2.2采用半自动凯氏定氮仪时，将带消煮液的消煮管插在蒸馏装置上，以25mL硼酸吸收液I （4.8）为吸收液，加人2滴混合指示剂（4.14），蒸馏装置的冷凝管末端要浸人装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加人50mL氢氧化钠溶液（4.10）进行蒸馏，至流出液pH值为中性.蒸馏时间以吸收液体积达到约100mL时为宜.降下锥形瓶，用水冲洗冷凝管末端，洗液均需流人锥形瓶内.
7.2.2.3采用全自动凯氏定氮仪时，按仪器操作说明书进行测定.
7.2.3滴定
用0.1mol/L盐酸标准滴定溶液（4.11）滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点.
7.3蒸馏步骤查验
量应为（21.19土0.2）%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确. 精确称取0.2g硫酸铵（精确至0.0001g），代答试样，按7.1或7.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮
7.4空白测定
酸标准滴定溶液的体积不得超过0.2mL，消耗0.02mol/L盐酸标准滴定溶液体积不得超过0.3mL.
8试验数据处理
试样中租蛋白质含量以质量分数w计，数值以质量分数（%）表示，按公式（1）计算：
式中：
V：--滴定试样所消耗盐酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；V-滴定空白所消耗盐酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；盐酸标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；
