中华人民共和国国家标准
GB/T 13087-2020代替GB/T13087-1991
饲料中异硫氰酸酯的测定方法
Determination of isothiocyanates in feeds
国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准代替GB/T13087-1991《饲料中异硫氰酸酯的测定方法》.本标准与GB/T13087-1991相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：
删除了银量法（见1991年版的第二篇）；增加了方法的检出限和定量限（见第1章）；一修改了方法的适用范围（见第1章，1991年版的第1章）：一修改了白芥子酶的制备方法（见4.10，1991年版的3.5）；一修改了白芥子酶的用量（见7.1，1991年版的6.1）； 一增加了异硫氰酸酯混合标准溶液的配制和应用（见4.12、4.13、7.3和第8章）：修改了气相色谱测定条件（见7.2，1991年版的6.2）；修改了测定结果计算公式（见第8章，1991年版的第7章）.
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本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口.
本标准起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、通威股份有限公司.
本标准主要起草人：张风秤、终建明、张艳红、李德祥、杨发树.
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
GB/T 130871991.
饲料中异硫氰酸酯的测定方法
1范围
本标准规定了饲料中异硫氰酸酯的气相色谱测定方法.本标准的检出限为2mg/kg，定量限为5mg/kg. 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和饲料原料中异硫氰酸酯的测定.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T5520粮油检验发芽试验GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
试样中的硫葡萄糖苷在pH7.0缓冲液中，在白芥子酶作用下生成丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯，用二氯甲烷提取，脱水、过滤后以气相色谱仪测定，内标法定量，结果以丙 烯基异硫氰酸酯计.
4试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂.
4.1水:GB/T6682，-级4.2二氯甲烷.4.3石油醚（沸程30C~60℃）.4.4无水硫酸钠.4.5柠檬酸溶液（0.1mol/L）：准确称取4.20g柠橡酸（CHOHO）溶解于水中，用水稀释并定容 至200mL，混匀.临用现配.4.6磷酸氢二钠溶液（0.2mol/L）：准确称取28.39g无水磷酸氢二钠（NaHPO ）溶解于水中，用水稀释并定容至1L，混匀.临用现配.4.7盐酸溶液（0.01mol/L)：准确移取0.9mL浓盐酸，用水稀释并定容至1L，混匀. 4.8氢氧化钠溶液（0.01mol/L)：准确称取0.40g氢氧化钠加水溶解，用水稀释并定容至1L，混匀.4.9pH7.0缓冲溶液：量取176.5mL柠檬酸溶液（4.5）于1000mL容量瓶中，用磷酸氢二钠溶液（4.6）稀释并定容至1000mL，混匀，用盐酸溶液（4.7）或氢氧化钠溶液（4.8）调整pH至7.0.临用现配.4.10白芥子酶：称取50g白茶（SinapisalbaL.）种子（按照GB/T 5520做发芽试验，72h内发芽率应大于85%，保存期不超过两年）粉碎后，置于500mL烧杯中，加人100mL石油醚（4.3），搅拌2min.静置，弃去上层液体，重复脱脂10次，使脂肪含量低于2%，置通风橱内使溶剂挥干，然后再粉碎一次，
80%通过0.28mm试验筛，装在密闭容器中，置于一18℃以下保存，有效期为6个月.为保证白芥子酶活性，制备过程中环境温度应保持在30℃以下，两次粉碎注意少量多次，防止粉碎机过热.
4.11丁基异硫氰酸酯内标溶液（0.1mg/mL）：准确称取50mg（精确至0.00001g）丁基异硫氰酸酯[CH（CH）NCS，CAS号：592-82-5，纯度>99%]于500mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷溶解并定容，混匀，于-18C以下保存，有效期为3个月.
4.12异硫氰酸酯混合标准溶液（1.0mg/mL）：分别准确称取10mg（精确至0.00001g）丙烯基异硫氰酸酯[CH=CHCHNCS CAS号：57-06-7，纯度≥99.7%]、丁烯基异硫氰酸酯[CH=CHCHCHNCS，CAS号：3386-97-8，纯度≥95.0%]、戊烯基异硫氰酸酯[CH=CHCHCHCHNCS，CAS号：18060-79-2.纯度≥95.0%]于10mL棕色容量瓶中，用丁基异硫氰酸酯内标溶 液（4.11）溶解并定容，混匀，于一18℃以下保存，有效期3个月.
量瓶中，用丁基异硫氰酸酯内标溶液（4.11）稀释定容配制成标准系列工作溶液，丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的浓度分别为0mg/mL、0 001mg/mL、0.02mg/mL、0.05 mg/mL 0.1mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL.丁基异硫氰酸酯内标浓度均为0.1 mg/mL.临用 现配.
4.14定性滤纸：快速，内径7.0cm.
5仪器设备
5.1气相色谱仪：配有氢火焰检测器（FID）.5.2分析天平：感量0.01g、0.0001g和0.00001g.5.3实验用样品粉碎机.5.4振荡器：往复，不低于200次/min. 5.5离心机：转速不低于5000r/min.
6样品
按照GB/T20195规定制备试样，至少200g-粉碎使其全部过0.42mm分析筛，混合均匀，装人密闭容器中，备用.
7试验步骤
7.1试样溶液制备
芥子酶（4.10）、5.0mLpH7.0缓冲溶液（4.9）、10mL丁基异硫氰酸酯内标溶液（4.11），于室温下 平行做两份试验.称取约2.0g（精确至0.0001g）试样置于100mL具塞三角瓶中，加人0.5g白200次/min振荡提取2h，将具塞三角瓶中内容物全部转人离心试管中，5000r/min离心10min，取下层溶液，用铺有2g~3g无水硫酸钠层的定性滤纸过滤，滤液备用.
7.2气相色谱参考条件
色谱柱：聚乙二醇（FFAP）毛细管柱，长30m，内径0.32mm，膜厚0.25μm，或性能相当者.色谱柱温度：起始温度100℃，保持10min，以10C/min升到200℃，保持2min.检测器温度：230℃. 进样口温度：220℃.
载气：高纯氮气.载气流速：1.0mL/min.氢气流速：35mL/min空气流速：400mL/min.进样量：1pl. 尾吹流速：20mL/min.分流比：5：1.
7.3测定
7.3.1标准溶液和试样溶液测定
定，各异硫氰酸酯标准溶液的气相色谱图参见附录A. 在仪器的最佳条件下，分别取异硫氰酸酯混合标准系列工作溶液（4.13）和试样溶液（7.1）上机测
7.3.2定性和定量
以保留时间定性，试样溶液中各异硫氰酸酯保留时间应与标准溶液中各异硫氰酸酯的保留时间一致，其相对偏差在土2.5%之内，内标法定量.
8试验数据处理
试样中异硫氰酸酯（以丙烯基异硫氰酸酯计）的含量以质量分数u计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算：
..................( 1)
式中：
一试样中丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的含 量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
99.15、113.18、127.21-分别为丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol）.
试样中各异硫氰酸酯的含量以质量分数w，计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，多点校正按式（2）计算，单点校正按照式（3）计算：
式中：
P--由标准曲线得出的试样溶液中各异硫氰酸酯的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL)；V提取溶液的体积，单位为毫升（mL）；
m试样质量，单位为克（g）.
式中：
A.试样溶液中各异硫氰酸酯色谱峰面积；A'.一混合标准溶液中丁基异硫氰酸酯内标的峰面积；P.用于校准的混合标准溶液中各异硫氰酸酯的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）： 试样溶液中丁基异硫氰酸酯内标的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；Ps
