中华人民共和国国家标准
GB/T14926.53-2001
实验动物 血凝试验
Laboratory animal-Haemoglutination test(HA)
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前 言
本标准修订了GB/T14926.24-1994（实验动物小鼠肺炎病毒检测方法》中的血凝试验方法，将其作为一个独立标准列出.
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口.
本标准起草单位：中国实验动物学会.
本标准主要起草人：贸争鸣.
中华人民共和国国家标准
实验动物 血凝试验
GB/T 14926.53-2001
Laboratory animalHaemoglutination test(HA)
1范围
本标准规定了血凝试验（HA）所用试剂、器材和操作步骤等.本标准适用于实验动物病毒抗原的检测.
2原理
某些病毒在一定的条件下，能够选择性地凝集某些动物红细胞，产生可见的凝集反应.
3主要试剂与器材
3.1试剂
3.1.1血凝素
血凝素抗原除部分病毒（如痘类病毒）能与感染性颗粒分开外，大部分是与病毒的感染性颗粒相关联，凡培养于鸡胚或组织培养中的病毒及其抗原物质，经离心除去沉淀，均可用作血凝试验的抗原（见表1、表2）.
表1血凝素制备方法
病毒 细胞 收毒（d) 病变（） 抗原处理 滴度（HA） 备注KRV H-1 RE RE ~12 7~12 2~3 2--3 冻融 2~3 次 2 000 x/min 离心10~20min，取上清 64 128 128CPV FK81 3~5 3~4 离心10~20min，取上请 >640ICHV MDCK 3~ 4 3~4 培养物冻融后离心，取上 >1 28020 rsin 清、经60C水浴作用10~RV BHK21 4~5 2--3 冻融2~3次，2000x/min >320 基础液中含0.2%~0.4%离心20min取上清 牛血清白蛋白
表2血凝素制备方法
病毒 （日龄） 动物 接种连 径剂量 抗原取材 时间 (d) 抗原处理 滴度（HA）TMEV 小鼠 ic0 02 ml. 脑 5~7 研磨成10%悬液，冻化2~3次 128~512(14~21) 1 000 r/min离心10min上清对Sendai 鸡胚（9） 尿囊0.2ml 尿囊液 3 倍加0 5%胰酶，4℃可短期保存 2 000rpm离心10min，取上清液 640RHDV 免 sc 2 mL 肝 2~4 研磨成10%悬液3000r/min离 8 190心10min取上清
