中华人民共和国国家标准
GB/T 15670.25-2017部分代替GB/T156701995
Toxicological test methods for pesticides registrationPart 25:Acute delayed neurotoxicity test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分：第1部分：总则：第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法；第3部分：急性经口毒性试验序贯法； 第4部分：急性经口毒性试验概率单位法；第5部分：急性经皮毒性试验；第6部分：急性吸人毒性试验；一第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验：第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验； 第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验：第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验：第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验；第12部分：短期重复吸人染毒（28天）毒性试验：第13部分：亚慢性毒性试验； 第14部分：细菌回复突变试验；一第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验：-一第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验；第18部分：嘀齿类动物显性致死试验： 一第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验；第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验；第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验：-第21部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS）试验：第23部分：致畸试验； 第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验：第24部分：两代繁殖毒性试验；第25部分：急性迟发性神经毒性试验；第27部分：致癌试验； 第26部分：慢性毒性试验；第28部分：慢性毒性与致癌合并试验；第29部分：代谢和毒物动力学试验.本部分为GB/T15670的第25部分.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本部分与GB/T15670-1995的迟发性神经毒性试验部分相比主要变化如下： 本部分部分代替GB/T15670-1995（农药登记毒理学试验方法》.调整了总体结构和编排格式；删除了“亚慢性试验“内容（1995年版的13.5.2）；增加了对神经病靶陷酶的测定要求（见6.5.3）. 增加了一些章节内容（见第1章、第2章、第3章、第5章、6.1、6.5.3和第7章）；
GB/T 15670.252017
本部分由中华人民共和国农业部提出并归口.本部分起草单位：农业部农药检定所.本部分主要起草人：王捷、陶传江、廖雪、宋宏宇、张丽英.本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 156701995
第25部分：急性迟发性神经毒性试验 农药登记毒理学试验方法
1范围
GB/T15670的本部分规定了急性迟发性神经毒性试验的基本原则、方法和要求.本部分适用于为农药登记面进行的急性迟发性神经毒性试验.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB14925实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
急性迟发性神经毒性acute delayed neurotoxicity
一次大量接触受试物后，早期出现神经病靶酯酶（NTE）活力抑制，此后的1周～2周内，动物逐渐出现以肢体无力和上位运动神经元癌率性瘫痪为主要表现的神经综合症，神经病理检查表现为脊髓和 周围神经远端轴索神经病.
3.2
磷酸酐、有机磷酸、氨基磷酸酯、硫代磷酸酯及氨基硫代磷酸酯等，它们中的有些成员能引起迟发性神经 含碳-磷键的化合物或含有机基团的磷酸衍生物，主要包括不带电的磷酸酯、硫代有机磷酸酯、有机毒性.
3.3
神经病靶酯酶neuropathy target esterase：NTE神经毒性酯酶neurotoxic esterase
一种能催化戊酸苯酯水解的膜结合蛋白.
4试验目的
评价和了解受试物（如有机磷化合物）引起急性迟发性神经毒性的潜在能力.
5试验概述
将受试物一次以尽可能大的剂量给母鸡经口染毒.为保证有足够的动物存活满足神经生化和组织病理学检查要求，可给胆碱能作用的防护剂.观察染毒的母鸡是否有行为异常、共济运动失调及瘫痪，
GB/T 15670.25-2017
连续21d.在染毒后24h和48h，每组随机选取动物进行生化检查，特别是测定神经病靶酯酶（NTE）.在染毒后21d，处死剩余的其他母鸡，取神经组织进行组织病理学检查.
6试验方法
6.1受试物配制
所选溶剂不与受试物产生化学反应，不影响受试物的吸收. 如受试物经口染毒，需要配制成为溶液，应采用水溶液、混悬液或油溶液.应了解溶剂的毒性，并且
6.2实验动物
6.2.1动物选择：选用8个~14个月健康初成年母鸡，无步态异常，体重1.5kg~2.0kg.受试物组和 溶剂对照组每组至少12只，阳性对照组至少6只.
6.2.2动物何养条件：在常规条件下何养母鸡，单笼饲养.鸡笼应足够大，以使动物能够自由活动，并易于观察动物步态.试验开始前，动物应在试验环境中检疫、适应至少5d，正常何喂，不限制饮水，实验动物何养环境应符合GB14925的有关规定.
6.3剂量及分组
一般应设受试物染毒组、阳性对照组和溶剂对照组.
受试物染毒组的剂量通过额试验来确定.预试验时，使用适当数量母鸡和剂量水平确定正式试验剂量.母鸡或其他动物的毒理学信息历史数据有助于剂量选择. 剂量达到的最大值.预试验应引起一定的致死率，可以使用多种试验方法来估计受试物的最大非致死
在正式试验中应选择尽可能高的剂量水平，允许个别动物出现死亡，但应有足够数量的动物存活用于生化（6只）和在21d时进行组织病理学检测（6只）.可使用已知的不干扰迟发性神经毒性反应的硫酸阿托品或其他预防性药物来保护动物免于急性胆碱能效应导致的死亡.
阳性对照组应保证至少有6只母鸡（3只用于生化检验，3只用于病理解剖并做组织病理学检查）给予迟发性神经毒性阳性物：三邻甲苯磷酸酯（tri-o-cresylphosphate，TOCP）.
对于溶剂对照组，如溶剂毒性已知，可仅设溶剂对照组：溶剂毒性未知，还应增设空白对照组.
限量试验：如果受试物染毒剂量在2000mg/kg体重，未引起可观察到的毒性作用，或根据结构相关化合物的分析获得的数据估计不会产生毒性，则没有必要进行更高剂量的试验.当人体暴露水平较高表明需要进行更高剂量试验时，不能采用限量试验.
6.4染毒方式
通常采用经口途径一次染毒，包括灌胃、胶囊吞咽或咽峡部滴注等方法染毒，隔夜禁食.灌胃体积可根据各组不同剂量按5mL/kg体重给予.为对抗急性胆碱能效应所致的动物死亡，给予受试物前10min～15min，可以肌肉注射已知不干扰迟发性神经毒性反应的硫酸阿托品作保护处理，硫酸阿托品 剂量为 10mg/kg体重.
6.5观察期限及指标
6.5.1临床观察与检查
染毒后立即开始观察，并于染毒后每半小时观察一次，2d后每天观察一次，直至21d试验结束.将母鸡出现的全部中毒反应、时间、类型、轻重程度以及发现行为异常的时间详尽记录，将母鸡置于笼外观察，强迫母鸡做活动以便有利于观察到最轻微的毒效应.取出濒死的母鸡处死并进行大体解剖.
