中华人民共和国国家标准
GB/T 17999.6-2008代替GB/T17999.5-1999
SPF chicken-Microbiological surveillance-Part 6:Enzyme-linked immunosorbent assay for SPF chicken
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
中华人民共和国国家标准SPF鸡微生物学监测第6部分：SPF鸡酶联免疫吸附试验 GB/T 17999 6-2008北京复兴门外三里河北街16号 出版发行邮政编码：100045电话：6852394668517548 网址 . spc. net cn秦泉岛印刷厂印刷各地新华书店经销开本880×12301/16印张0.5字数9千字2009年4月第一版2009年4月第一次印刷书号：155066 • 1-36493如有印装差错由本社发行中心调换：（010）
前言
GB/T17999《SPF鸡微生物学监测》分为10个部分：
第1部分：SPF鸡微生物学监测总则： 第2部分：SPF鸡红细胞凝集抑制试验：-第3部分：SPF鸡血清中和试验；-第4部分：SPF鸡血清平板凝集试验；第5部分：SPF鸡琼脂扩散试验； 第6部分：SPF鸡酵联免疫吸附试验；第7部分：SPF鸡胚敏感试验：-第8部分：SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验；第9部分：SPF鸡试管凝集试验：一第10部分：SPF鸡间接免疫荧光试验.
本部分为GB/T17999的第6部分.
本部分修订参照了GB/T18936-2003（高致病性禽流感诊断技术》、GB/T19167-2003（传染性囊病诊断技术）、NY/T538-2002（鸡传染性鼻炎诊断技术》、OIE（陆生动物（哺乳动物、禽鸟和蜜蜂）诊断试验和疫苗手册（第五版）中的有关规定.
本部分代替GB/T17999.5-1999（SPF鸡酶联免疫吸附试验》.
本部分与GB/T17999.5-1999相比主要变化如下：
增加了间接酶联免疫吸附试验；
增加了附录A“试剂的配制”.
本部分的附录A为规范性附录.
本部分由中华人民共和国农业部提出.
本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法斯家禽有限公司.
孟庆文. 本部分主要起草人：曲连东、姜赛、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、刘家森、司昌德、郭东春、于海波、
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：
GB/T 17999. 51999.
SPF鸡微生物学监测 第6部分：SPF鸡酶联免疫吸附试验
1范围
GB/T17999的本部分规定了酶联免疫吸附试验的技术要求.
本部分间接酵联免疫吸附试验适用于对SPF鸡进行以下病原微生物的血清抗体检测：副鸡嗜血杆禽流感病毒（Avian Influeza Virus）、新城疫病毒（NewcastleDisease Virus）、传染性支气管炎病毒 菌（Haemophilus）、鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum）、滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae）、(Infectious Bronchitis Virus）、传染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus）、网状内皮增生症病毒（Reticuloendotheliosis Virus）、鸡传染性贫血病毒（Chicken Infectious Anaemia Virus）、禽呼肠孤病毒（病毒性关节炎）（Avian Reovirus）、禽脑脊髓炎病毒（AvianEncephalomyelitis Virus）、传染性气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus）、禽腺病毒Ⅲl群（EDS)（AvianAdenovirus Group Ⅲ）、淋巴细胞白血病病毒（Lymphoid Leukosis Virus).
本部分双抗体夹心酶联免疫吸附试验适用于对SPF鸡进行淋巴细胞白血病病毒P27抗原检测.
2原理
知抗体检测未知抗原， 间接酶联免疫吸附试验采用已知微生物抗原检测未知抗体，双抗体夹心酶联免疫吸附试验采用已
3间接酶联免疫吸附试验
3.1试剂3.1.1包被抗原，阴性、阳性对照血清，羊抗鸡LgG酶标抗体，按说明书保存和使用. 3.1.2包被液、稀释液、底物液、终止液配制方法见附录A
3.2器材
酶标板，移液器，37C恒湿培养箱，酶标仪.
3.3操作程序
城疫病毒、副鸡嗜血杆菌、禽腺病毒Ⅲ群（EDS）、鸡毒支原体、滑液囊支原体、禽脑脊髓炎病毒、淋巴细胞白血病病毒、网状内皮增生症病毒、禽呼肠孤病毒（病毒性关节炎）、鸡传染性贫血病毒抗原用包被液稀
3.3.1抗原包被：将禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性喉气管炎病毒、新释至工作浓度，加入酶标板各孔中，每孔100pL，置4C冰箱过夜.3.3.2洗涤：甩净孔内抗原溶液，用洗涤液加满各孔，放置5min.然后甩净，如此重复3次.孔两个，阳性对照孔、空白对照孔各一个，分别加入同样稀释的阴性血清、阳性血清和稀释液各100pL，加不同的血清样品时应换吸头、37C温箱中作用30min.3.3.4洗涤：同3.3.2.3.3.5加羊抗鸡1gG酶标抗体：用稀释液将酶标抗体稀释至工作浓度，每孔加人100gL.37C温箱中 作用 30 min.3.3.6洗涤：同3.3.2.
3.3.7显色：加人底物液100pl，室温避光反应5min左右（至阴性对照孔开始产生颜色时）.
