中华人民共和国国家标准
GB/T 17999.9-2008代替GB/T 17999.81999
SPF chicken-Microbiological surveillancePart 9:Tube agglutination test for SPF chicken
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T17999《SPF鸡微生物学监测》分为10个部分：一第I部分：SPF鸡微生物学监测总则； 一第2部分：SPF鸡红细胞凝集抑制试验：一第3部分：SPF鸡血清中和试验；-第4部分：SPF鸡血清平板凝集试验；第6部分：SPF鸡酵联免疫吸附试验： 第5部分：SPF鸡琼脂扩散试验；第7部分：SPF鸡胚敏感试验；第8部分：SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验；-第9部分：SPF鸡试管凝集试验：第10部分：SPF鸡间接免疫荧光试验.
本部分为GB/T17999的第9部分.
增加了附录A"试剂的配制”：剩除了鸡伤寒沙门氏菌检测内容； 修改了凝集试验结果的判定：一在范围中进一步明确了本部分使用的情况.
本部分的附录A为规范性附录.
本部分由中华人民共和国农业部提出.
本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口.
本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法斯家禽有限公司
本部分主要起草人：曲连东、姜赛、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、刘家森、司昌德、郭东春、于海波、孟庆文.
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：
-GB/T 17999. 81999
SPF鸡微生物学监测 第9部分：SPF鸡试管凝集试验
1范围
GB/T17999的本部分规定了试管凝集试验的技术要求.本部分适用于对SPF鸡进行鸡白痛沙门氏菌血清抗体检测.用血清平板凝集试验进行鸡白痢沙门氏菌的抗体检测，结果难以判断时，可采用本部分进行复检.
2原理
细菌性抗原与相应的抗体结合后，在适量电解质参与下，经过一段时间出现肉眼可见的凝集现象，结果判定以凝集价表示.
3试剂和器材
3.1试剂
鸡白痛抗原（含菌10CFU），标准阳性、阴性血清，被检血清，0.5%石炭酸生理盐水（配制方法见附录A).
3.2器材
试管（口径8mm~10 mm）.
4操作程序
4.1取5支试管，第1管加石炭酸生理盐水1.8mL，其余各管加1mL，第1管加被检血清0.2mL，与弃去，各管血清最后稀释度依次为1：20.1140，1：80，1：160，1：320. 石炭酸生理盐水混匀（1：10稀释），取1mL移至第2管，连续倍比稀释至第4管，从第4管吸出1mL
4.2每管加入抗原液1mL，
4.3抗原对照：在试管中加抗原液1mL，加0.5%石炭酸生理盐水1mL.
4.4阳性血清对照：将阳性血清稀释至工作浓度（按说明使用）.在试管中加抗原液1mL，加稀释的阳 性血清1mL.
4.6试管振荡后，置37C温箱中孵育，24h后移人4C~8C冰箱过夜.
4.7结果观察：抗原对照结果与阴性血清对照，均星“一”阳性血清对照呈不同程度凝集，表明试验成立.凝集结果判定见表1.凝集效价以呈现”十"凝集试管的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价.
表1凝集试验结果判定
类别 试管所见 结果 判定1 出现大的凝集块，上层液体完全透明 2 出现明显凝集块，上层液通明度达75% 期性3 出现可见的凝集题粒，上层液透明度达50% 4 出现轻微可见的凝集额粒，上层液透明度达25% ± 可疑5 无凝集块，液体均匀混注 阴性
