中华人民共和国国家标准
GB/T 17999.10-2008代替GB/T 17999.9-1999
SPF chicken-Microbiological surveillance-Part 10:Indirect immunofluorescent assay for SPF chicken
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T17999《SPF鸡微生物学监测》分为10个部分：一第1部分：SPF鸡微生物学监测总则； 一第2部分：SPF鸡红细胞凝集抑制试验：一第3部分：SPF鸡血清中和试验；-第4部分：SPF鸡血清平板凝集试验；第6部分：SPF鸡酵联免疫吸附试验： 第5部分：SPF鸡琼脂扩散试验；第7部分：SPF鸡胚敏感试验：第8部分：SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验；第9部分：SPF鸡试管凝集试验；一第10部分：SPF鸡间接免疫荧光试验.
本部分为GB/T17999的第10部分.
一详细界定了试验成立条件和待检样品的判定标准.
本部分的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录.
本部分由中华人民共和国农业部提出.
本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口.
斯家禽有限公司. 本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：
GB/T 17999. 91999
SPF鸡微生物学监测 第10部分：SPF鸡间接免疫荧光试验
1范围
GB/T17999的本部分规定了间接免疫荧光试验的技术要求等.
本部分适用于对 SPF鸡进行鸡传染性贫血病毒（Chicken Infectious Anaemia Virus，CIAV）抗体的检测.
2原理
抗抗体结合，形成抗原一抗体一抗抗体复合物.荧光色素在紫外光或蓝紫光的作用下，激发出可见的荧标记的抗抗体检测相应的抗体. 光，因此出现荧光就说明标记物的存在，同时也反映了特异性抗体的存在.常采用已知抗原及荧光色素
3试剂和器材
3.1试剂
3.1.1CIAV病毒DELROSE株. 3.1.2阴性、阳性血清.3.1.3被检血清.3.1.4磷酸盐缓冲液（PBS）（见附录A）.3.1.5异硫氰荧光素（FITC）标记抗鸡IgG（按说明稀释使用）.3.1.6缓冲甘油或封片剂（见附录A）. 3.1.7丙酮.
3.2.1抗原片.3.2.2湿盒.3.2.337C培养箱. 3.2.4荧光显微镜.
4操作程序
4.1感染细胞的制备
细胞长至每毫升5×10个时（细胞计数参见附录B），接种CIAV，并换成含5%新生牛血清的DMEM 用含15%新生牛血清的DMEM培养基在39C和5%二氧化碳环境中培养MDCC-MSB1细胞.培养基，继续培养36h~48h.
4.2抗原片的制备
4.2.1细胞病变（细胞体积增大2倍~3倍）约达50%~75%时，收集细胞培养物，以1500r/min离心 10min，弃上清液，用PBS洗涤细胞沉淀物3次，并细胞计数，用PBS重悬细胞浓度.4.2.2取10gL细胞悬液（约含细胞10”个），滴加于抗原片各孔中，同时制备正常细胞对照片.4.2.3吹干滴好的抗原片，用4C预冷的丙酮固定10min，保存于一20C，一周内使用.
