中华人民共和国国家标准
GB/T 18089-2008代替GB/T180892000
Isolation identification and serum neutralization antibodytest in Bluetongue virus
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准与GB/T18089-2000相比主要变化如下： 本标准代替GB/T18089-2000（蓝舌病微量血清中和试验及病毒分离和鉴定方法》.
对标准名称进行了修改：一副除了蓝舌病病毒鉴定中的病毒中和试验部分：增加了病毒鉴定中RT-PCR方法的鉴定.
本标准的附录A为规范性附录.
本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口.
本标准起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局.
GB/T 18089-2000
蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和 抗体检测技术
1范围
本标准规定了蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和抗体检测的技术.本标准适用于蓝舌病病毒的分离、鉴定及动物感染蓝舌病病毒后血清中和抗体的检测.
2符号和缩路语
下列符号和缩略语适用于本标准.BHK幼仓鼠肾细胞株： BLP-乳糖蛋白陈缓冲肉汤；BT蓝舌病：bp-碱基对：CPE-致细胞病变作用；C6/36-蚊子细胞株； DEPC焦碳酸二乙酯；SPF-无特定病原体；TCID-半数组织培养感染量；Vero-非洲绿聚肾细胞株.
3蓝舌病病毒分离
10 日龄~11日龄SPF鸡胚.
鸡胚开孔器、照蛋灯或照蛋箱、乳链或组织捣碎器、例置显微镜.
3.3试验程序
3.3.1样品
样品应置冷藏容器中保存，在24h内送到实验室，并立即进行处理. 肝素抗凝血（每5mL血液用10IU肝素）、脏器（脾、肝、肾、淋巴结）、精液、库.用于病毒分离的
3.3.2血液样品制备
取肝素抗凝血5mL，用磷酸盐缓冲液（PBS.配方见附录A）洗涤血样3次~4次，每次2000r/min离心10min，弃上清液后加人倍量BLP（配方见附录A），置冰浴中用超声波处理（40A、1min）.经处理的样品当天使用，使用前置4C保存，剩余样品置一70C保存备用.
3.3.3组织样品制备
无菌采集动物脾、淋巴结、肝、肾各5g，剪碎后加入BLP10mL（含青霉素2000IU/mL、链霉素2 000 yg/mL），置乳钵中研磨，4C冰箱中浸提4h，取上清液5mL用超声波裂解处理（100μA.1min~存备用.
3.3.4精液样品制备
取精液样品0.5mL.用BLP作1：5稀释后，3O00r/min离心20min，弃上清液，再用BLP作
