中华人民共和国国家标准
GB/T 18637-2018代替GB/T18637-2002
Technical specifications for diagnosis of bovine viral diarrhea /mucosal disease
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准代替GB/T18637-2002《牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术》，除编辑性修改外，主要技术变化如下：
增加了“临床诊断”方法（见第4章）：
增加了“实时荧光RT-PCR检测”（见5.4）.
本标准由中华人民共和国农业农村部提出.
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口.
民共和国宁夏出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中国动物卫生与流行病学 本标准起草单位：中国兽医药品监察所、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、扬州大学、中华人中心.
本标准主要起草人：李俊平、刘环、印春生、陶洁、郝俊虎、蒲静、范学政、吴华伟、孙淼、王建华、宋建德、朱国强.
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
-GB/T 18637-2002
引言
牛病毒性腹泻/粘膜病（Bovine Viral Diarrhea /MucosalDiseaseBVD/MD，简称 BVD），是由牛病毒性腹泻/粘膜病病毒（Bovine Viral Diarrhea/Mucosal Disease Virus，BVD/MDV.简称BVDV）感染牛引起的以发热、粘膜廉烂溃疡、白细胞减少、腹泻、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的 一种传染病.BVDV在分类学上属黄病毒科（Flaviviridae），瘤病毒属（Pestivirus），是瘟病毒属的代表种，目前国际病毒分类委员会确定的BVDV有二个基因型（或种），分别是BVDV-1和BVDV-2.它们与同属的猪癌病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）及羊边界病病毒（Border DiseaseVirus，BDV）之间存在着结构与抗原相关性，在血清学上有部分交叉反应.BVDV-1引起的疫病呈全球分布，较为常见，而BVDV-2引发的疫病不多见，二个基因型的病毒均可根据其在培养细胞上能否产生细胞type，NCP）.NCP毒株是引起感染和发病类型的生物型，而CP毒株主要出现在粘膜病病例.
目前，该病在世界范围内广泛流行，我国于1983年首次分离到了BVDV.近年来，病原学调查表明我国牛、羊、鹿、猪等均不同程度的感染BVDV，该病已严重影响着我国畜牧业的健康发展.
断及血清学诊断技术，血清学诊断技术为病毒中和试验.病原学诊断技术包括病毒分离鉴定和实时荧 本标准中所描述的方法均为近几年我国在BVD诊断过程中常用的方法，包括临床诊断、病原学诊光RT-PCR（Real-time RT-PCR）检测方法，本标准中的Real-time RT-PCR检测方法具有BVDV特异性，能够同时检测BVDV-1和BVDV-2，且能特异区分BVDV与CSFV
流行.
牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术规范
1范围
本标准规定了牛病毒性腹泻/粘膜病的流行病学、临床症状、病理变化等临床诊断，及样品采集与处理、病毒分离与鉴定、Real-imeRT-PCR检测及病毒中和试验等实验室诊断的技术要求和操作规范.
本标准适用于检测不同样品中的1型和2型牛病毒性腹泻/粘膜病病毒、核酸及抗体水平.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫
3缩略语
下列缩略语适用于本文件.BVID/MD：牛病毒性腹泻/粘膜病（Bovine Viral Diarrhea/Mucosal Disease) BT:牛鼻甲骨细胞(Bovine Turbinate cell)BVD/MDV：牛病毒性腹泻/粘膜病病毒（Bovine Viral Diarrhea /Mucosal DiseaseVirus)CPE：致细胞病变效应（CytopathicEffect）CP：致细胞病变型（Cytopathic type） cRNA:互补 RNA(Complement RNA)C1（Cp）：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阅值所经历的循环数（CycleThreshold，orCrossing Point)DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethyl Pyrocarbonate)FAM：羧基荧光素（Carboxyfluorescein） FBS:胎牛血清(Fetal Bovine Serum)FITC：异硫氰酸荧光素（FluoresceinIsothiocyanate）MDBK：牛肾继代细胞(Madin-Darby Bovine Kidney celI)NCP：非致细胞病变型（Non-cytopathic type） MEM：基础培养基（Minimum Essential Medium）PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer Saline)PBST：吐温磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer Solution with Tween20)P1：持续性感染（Persistent Infection）Chain Reaction) Real-time RT-PCR：实时荧光反转录聚合酶链反应（Real-time Reverse Transcription Polymerase
TCID：组织半数感染量（Median Tissue Culture Infective Dose)
4临床诊断
4.1流行病学
BVDV可感染各种年龄的牛，青年牛可发生急性感染，怀孕牛极易发生垂直传插.急性感染的牛病毒血症持续时间较短，表现为一过性排毒，而且排毒量低，在疫病的传播中不起主要作用.怀孕牛感 染可引起流产、胚胎吸收、死胎、先天性缺陷或出生牛的持续性感染（PI）等.怀孕120天之前先天性感染的胎牛，出生后往往表现为PI，它们可终身带毒及排毒，是BVDV的主要储存宿主和传播来源.
BVDV的水平传播导致急性感染，主要发生在同牛群内或临近牛群间的相互感染，其中易感牛与PI牛直接接触是BVDV水平传播的主要途径.
4.2临床症状
4.2.1亚临床感染
在免疫机能健全、血清抗体阴性的牛发生BVDV感染时，70%～90%的牛不表现出明显的眼观临床症状，即处于亚临床感染状态.可导致湿和型发热、白细胞减少症和血清中和抗体的产生，对泌乳期奶牛可导致产奶量降低.
4.2.2急性感染
急性BVDV感染通常发生在免疫机能健全的青年牛群，以6月龄~24月龄的血清抗体阴性牛常见.临床症状包括不同程度的高热、厌食、精神沉郁、白细胞减少、眼和鼻腔分泌物增加、口腔溃疡、口腔脓包和出血、腹泻、呼吸困难以及泌乳期产奶量降低等，在乳房和皮肤交接处及乳头上常见皮肤溃烂.症状.发病的严重程度与感染毒株的毒力以及是否继发感染密切相关. 死亡率不高，个别病牛表现出临床症状后3天～10天死亡.也有一些急性感染的牛不表现明显的临床
4.2.3严重急性感染
然死亡，怀孕母牛发生流产.血小板减少症和出血性综合征是严重急性BVDV感染的表现形式，感染 发生严重急性感染时显著特征为高发病率和高死亡率，各种年龄均有发生，表现为高热、肺炎和突牛通常表现为血小板严重减少，粘膜表面淤血、鼻出血、血性腹泻、高热、白细胞减少和死亡等.近年来，报道的严重急性感染多由NCP的BVDV基因2型毒株所致.
4.2.4持续性感染（PI)
妊娠母牛在怀孕早期（约120天前）感染BVDV后可导致病毒的垂直传播，从面感染胎牛，感染的胎牛出生后存活下来的大部分鞍牛都会发展成为P1牛.PI牛是BVDV最主要的储存宿主和传播来源，可终生带毒并通过尿、粪、分泌物、奶或精液大量排毒.该感染类型无特定的病变，临床差异较大.有的表现正常，有的衰弱无力，站立和哺乳都困难，也可表现为神经系统缺陷（如肌肉颤抖、共济失调及失明等），严重的常在出生数日内死亡.为确诊P1牛，对排毒牛需间隔3周后再次检测牛的排毒情况， 如果仍排毒，可以判定为P1牛.
4.2.5粘膜病（MD）
致病机理是胎儿时期感染了NCP的BVDV毒株的牛，又感染了与此毒株抗原相近的CP株，引发了粘 MD是BVDV感染引起的一种最严重的临床类型，只发生于P1牛，一般呈散发性，比较少见.其2
