中华人民共和国国家标准
GB/T19528-2004
奥尼罗非鱼亲本保存技术规范
Technique standard in holding the parents of hybrid betweennile tilapiaand blue tilapia
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准的附录A、附录B和附录C为规范性附录.本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口，本标准起草单位：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心.本标准主要起草人：吴婷婷、杨弘、李建林.
奥尼罗非鱼亲本保存技术规范
1范围
本标准规定了奥尼罗非鱼亲本一奥利亚罗非鱼（Oreochromisaurea）和尼罗罗非鱼（Oreochromiswilotics）的来源、纯种鉴别、隔离饲养、提纯复壮和建档管理技术.
本标准适用于奥尼罗非鱼亲本的保存.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
NY/T5054无公害食品尼罗罗非鱼养殖技术规范SC1027尼罗罗非鱼SC1042奥利亚罗非鱼 SC/T1045奥利亚罗非鱼亲鱼SC/T1046奥尼罗非鱼制种技术要求
3亲本来源
3.1奥利亚罗非鱼来源按SC/T1045的规定执行. 3.2尼罗罗非鱼来源按NY/T5054的规定执行.
4亲本纯种鉴别
4.1形态学鉴别
奥利亚罗非鱼的外部形态特征应符合SC1042的规定；尼罗罗非鱼的外部形态特征应符合SC1027的规定.
4.2细胞遗传学鉴别
奥利亚罗非鱼的染色体数与核型应符合SC1042的规定；尼罗罗非鱼的染色体数与核型应符合SC 1027的规定.
4.3生化遗传学鉴别
在血清酯酶的等电聚焦电泳图谱上，奥利亚罗非鱼具有一条等电点为pH4.69的特异性酶带，尼罗罗非鱼具有一条等电点为pH4.63的特异性酶带.血清酯酶等电聚焦技术见附录A.
4.4分子遗传学鉴别
4.4.1酶切线粒体DNA标记技术
用限制性内切酶PvuII酶切在尼罗罗非鱼mtDNA上有3个或4个PvuIⅡI位点，奥利亚罗非鱼mtDNA上有5个PvuⅡI位点.酶切线粒体DNA标记技术见附录B.
4.4.2随机扩增多态性DNA技术（简称RAPD技术）
应用RAPD技术筛选出四种引物可检测奥利亚罗非鱼或尼罗罗非鱼.引物OPZ06，奥利亚罗非鱼有一条900bp的片段，在尼罗罗非鱼中没有. 引物OPZ10，尼罗罗非鱼有一条1500bp的片段，在奥利亚罗非鱼中没有.引物OPZ12，尼罗罗非鱼有一条1700bp的片段，在奥利亚罗非鱼中没有.
GB/T 19528-2004
RAPD标记技术见附录C.
引物OPZ19，尼罗罗非鱼有一条730bp的片段，在奥利亚罗非鱼中没有.
5隔离饲养
5.1养殖
奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼的苗种、成鱼与越冬期的养殖均按NY/T5054的规定执行.
5.2隔离措施
5.2.1制定隔离保种制度，并严格执行，定期检查. 5.2.2纯种繁殖用鱼池和供生产奥尼杂交鱼用鱼池要严格隔离.5.2.3奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼分区专池饲养，各区建立独立的进、排水系统，进、排水口安置过滤网，严防混杂.5.2.4不同来源、不同家系、不同世代的奥利亚罗非鱼和尼罗罗非鱼要分池隔离何养、越冬.
6提纯复壮
6.1选育方法
6.1.2第二次筛选是鱼种培育到100g/尾左右的鱼种时，选留符合SC1042和SC1027的规定，表型 优良、生长快的个体.6.1.4第四次筛选是在翌年春出越冬池时，严格按照SC1042、SC1027和SC/T1046的规定进行，并放人产卵池繁殖.
6.2品种提纯
采用混合选择和家系选择相结合的方法.混合选择是从原品种繁殖的后代中，选出符合SC1042、SC1027和SC/T1046的规定、表型优良的个体，建立5~6个家系，分池饲养，培育成亲鱼.对所建的每个家系留1000尾（雌800尾，雄200尾）以上的优良个体，进行同代同血缘的同质选配，对后代进行如此经四个世代筛选，最后选出2～3个优良的家系.
6.3复壮
6.3.1选择性状良好，生长快，繁殖力强的不同家系，进行配对繁殖.子代按5.2.3隔离饲养.6.3.2保留1000尾（雌800尾，雄200尾）以上的不同品种、不同家系、不同世代的亲本，以使保持各6.3.3进行严格而持续的选择. 自后代群体的杂合性，降低近交系数，防止品种退化.
7建档管理
7.1建档
活率. 建档的原始资料一般为：引种来源、原名、原来性状、检疫、引进单位、时间、地点、数量、规格、成
7.2育种记录
育种的主要记录如下：
一引进种的培育：鱼池面积、水源、水深、水质、放养量、投饵施肥、生长、病害防治及日常管理等.一苗种培育：品种、面积、水源、水深、水质、放养量、何养管理、病害防治、选育、出池、销售等情况. 一繁殖：配伍、催产、孵化、出苗情况等.一后备亲鱼培育：品种、面积、水源、水深、水质、放养量、饲养管理、病害防治、选育、出池、销售等
情况.
7.3选育记录
选育的主要记录为：
a）第一次筛选：鱼苗至鱼种时，选留数量、平均体重（群体平均体重量）、表型性状.b）第二次筛选：鱼种至100g体重时，选留数量、平均体重（群体平均体重量）、表型性状.c）第三次筛选：100g体重至越冬时，选留数量、平均体重（群体平均体重量）、表型性状.d）第四次筛选：越冬至翌年春出池时，选留数量、平均体重（群体平均体重量）、表型性状.生产中及时、准确记录、定期汇总归档，并接受监督检查.
提纯复壮的主要记录为：品种、来源、家系、世代、性状、育种（按7.2记录）、选育（按7.3记录）.
