中华人民共和国国家标准
GB/T 20364-2006
动物源产品中聚醚类残留量的测定
Determination of polyether ionophore residues in products of animal origin
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、山东省质量技术监督局. 本标准由山东省质量技术监督局提出并归口.本标准主要起草人：林黎明、张鸿伟、梁增辉、王岩、孟兆宏.
动物源产品中聚醚类残留量的测定
方法一液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了动物源产品中莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素3种聚醚类残留量液相色谱-申联质谱的测定方法.
本标准适用于禽、免等动物源产品中莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素残留的确证和定量测定.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T6682-1992，neqISO)3696：1987)
3原理
试样中聚醚类残留，采用异辛烷提取，提取液用硅胶柱净化.液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量.
4试剂和材料
4.1水：应符合GB/T6682中一级水的规定.4.2异辛烷：分析纯.4.3甲醇：液相色谱级.4.5甲醇-二氯甲烷（19）：甲醇、二氯甲烷按体积比1：9混匀. 4.4二氯甲烷：分析纯.4.6无水硫酸钠：分析纯，500C灼烧4h，置于干燥器中备用.4.7甲醇-水（132）：甲醇、水按体积比13：2混匀.4.8莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素标准品：纯度99%.4.93种聚醚类标准储备溶液：200pg/mL.分别准确称取适量的莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素标 准品，用甲醇配成200μg/mL的标准储备溶液（4C避光保存可使用6个月）.4.103种聚醚类标准中间溶液：10μg/mL.分别准确量取适量的标准储备溶液（4.9）.用甲醇-水（4.7）稀释成10pg/mL的标准中间溶液（4C避光保存可使用1个月）.度系列为 10 0 ng/mL、25. 0 ng/ml、50.0 ng/mL、100 0 ng/mL、250. 0 ng/mL、500. 0 ng/mL的聚醚 4.113种聚醚类混合标准工作溶液：准确量取适量的标准中间溶液（4.10），用甲醇-水（4.7）配制成浓类混合标准工作溶液（4C避光保存可使用1周）.4.123种聚醚类混合标准添加溶液：100ng/mL.准确量取适量的聚醚类混合标准中间溶液（4.10），用甲醇-水（4.7）稀释成100ng/mL的聚醚类标准添加溶液（4C避光保存可使用1周）.
5仪器
5.1液相色诺-串联质语仪：配有电喷雾离子源.
GB/T 20364-2006
5.2均质器.5.3涡流混匀器.5.4旋转蒸发仪.5.5固相萃取装置， 5.6氮吹仪.5.7离心机：转速4000r/min.5.8聚四氟乙烯离心管：50mL5.10移液器：200 μL、1 000μL、5 000 μ. 5.9固相萃取硅胶柱：500mg，3ml.5.11三角烧瓶：50ml.5.12分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台.5.13一次性注射式滤器：配有0.45um微孔滤膜.5.14样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖.
6试样制备与保存
6.1试样制备
从原始样品中取出部分有代表性样品，经高速组织捣碎机均匀接碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样：一份作为留样.
6.2试样的保存
试样应在一20C条件下保存.
7测定步骤
7.1标准曲线制备
250.0 ng/mL、500.0 ng/mL（分别相当于测试样品含有2. 0pg/kg、5. 0μg/kg、10.0μg/kg、20.0pg/kg、 制备混合标准工作液（4.11），浓度系列分别为 10.0ng/mL、25 0ng/mL. 50.0ng/mL、100.0ng/mL、50.0pg/kg、100.0μg/kg目标化合物），按7.4的规定测定并制备标准曲线，
7.2提取
称取5.0g试样，置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加人15mL异辛烷，均质3min，另取10mL异辛烷冲洗刀头，合并于上述离心管中，涡流混匀，振荡30s，于离心机上以3500r/min的速率离心三角烧瓶中.
7.3净化
于硅胶萃取柱上加入灼烧后的无水硫酸钠1.0g，用5mL异辛烷润湿，然后将三角烧瓶中的提取液缓慢加人到萃取柱上，施以适当压力，使其以3mL/min的速度流出，注意不得使柱子流于，而后用15mL二氯甲烷以2mL/min的速率淋洗萃取柱，弃去淋洗液，待二氯甲烷流尽后再加压冲柱0.5min， 使萃取柱中残存的二氯甲烷充分流出.再加入甲醇-二氯甲烷（4.5）15mL，以1mL/min的速率洗脱，收集洗脱液，于40C减压蒸发至近干，氮气吹干，准确加入1mL甲醇-水溶液（4.7）溶解残渣，涡流混匀后，用一次性注射式滤器过滤至样品瓶中，液相色谱-申联质谱仪测定.
7.4测定
7.4.1液相色谱条件
a）色谱柱：C柱（可用Intersil ODS-3，粒径5μm，柱长150mm，内径4.6mm或相当者）；b）流动相：甲醇1%甲酸溶液（梯度洗脱见表1）；
表1
时间/min 甲醇/（%） 1%甲酸溶液/（%）0 66 18 7 13
c）流速：0.9mL/min:d）柱温：26C；e）进样量：10gL
7.4.2质谱条件
a）离子源：电喷雾离子源： b） 扫描方式：正离子扫描；c) 检测方式：多反应监测；d) 电喷雾电压：5500V；e) 气帘气压力：0.241MPa； 雾化气压力：0.344MPa；g) f) 辅助气压力：0.344MPa；h) 离子源温度：400C：定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表2.
表23种聚醚类的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压
名 称 定性离子对/（m/z) （母离子/子离子） 定量离子对/（m/z) （母离子/子离子） 碰撞气能量/eV 去族电压/V692 9/479.2 72 230莫能菌索 692 9/461. 2 692 9/479 2 72 230盐霉索 773 1/431. 2 72 220773 1/513. 3 773 1/431. 2 67 200甲基盐霉索 787 5/431 2 787 5/431 2 70 220787 5/513 3 67 200
7.4.3液相色谱-串联质谱测定
用混合标准工作液（4.11）分别进样，以峰面积为纵坐标，工作液浓度（ng/mL）为横坐标.绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中3种目标化合物的响应值均应在仪器测定的线性范围内.在上述色谱条件和质谱条件下，3种目标化合物的参考保留时间见表3.3种目标化合物标准品的总离子流图和选择离子流图参见附录A中的图A.1、图A.2.
表33种聚醚类标准品的参考保留时间
莫能菌索 名 称 保留时间/min 3.48盐霉素 4 44甲基垫霉索 5.17
8结果计算
试样中每种聚醚类残留量按式（1）计算：
( 1)
