中华人民共和国国家标准
GB/T 20759-2006
Method for the determination of sixteen sulfonamide residuesin livestock and poultry muscles-LC-MS-MSmethod
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准的附录A和附录B为资料性附录.本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出. 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口.本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局.本标准主要起草人：庞国芳、曹彦忠、贾光群、张进杰、范春林、李学民、刘永明、石玉秋本标准系首次发布的国家标准.
畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和免肉中十六种磺胺类药物残留量液相色语-串联质谱测定方法.
本标准适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和免肉中十六种磺胺类药物残留量的测定.
唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺-6-甲氧嗜啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺甲基异咳唑为5.0μg/kg，磺 本标准的方法检出限：磺胺甲噻二唑为2.5μg/kg，磺胺醋酰、磺胺嗜啶、磺胺吡啶、磺胺二甲异暖胺噻唑，磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧啶为10.0μg/kg，磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶为20.0pg/kg.磺胺苯吡唑为40.0yg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
(GB/T 6379. 12004 ISO 5725-1:1994 IDT) GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-1992 neqISO3696：1987)
畜禽肉中磺胺类药物残留用乙晴提取，离心后，上清液用旋转蒸发器浓缩近干，残渣用流动相溶解，并用正已烷脱脂后，样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1乙晴：色谱纯.4.2异丙醇.4.3正已烷.4.4乙酸铵. 4.5无水硫酸钠：经650C灼烧4h.置于干燥器中备用.4.6流动相：乙晴0.01mol/L乙酸铵溶液（1288).4.7磺胺醋酰、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲异恶唑、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺甲基异咳唑、磺胺噻唑、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺毗啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氢哒嗪、磺胺二4.8十六种磺胺标准储备溶液：0.1mg/mL.准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成 甲嘧啶、磺胺苯毗唑、磺胺间二甲氧嘧啶标准物质：纯度≥99%.0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4C保存，可使用二个月.
GB/T 20759-2006
4.9基质混合标准工作溶液：根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度
4.10滤膜；0.2 yum.
5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源.5.2匀质器.5.3旋转蒸发器. 5.4液体混匀器.5.5离心机.5.6分析天平：感量0.1mg，0.01g.5.7移液器：1mL.2mL.5.8鸡心瓶：100mL. 5.9样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖.
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内.密封作为试样，标明标记.在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.2试样保存
将试样于-18C冷冻保存.
7测定步骤
7.1样品制备
称取5g试样，精确至0.01g，置于50mL离心管中，加人20g无水硫酸钠（4.5）和20mL乙晴重复上述操作一次.合并提取液，向鸡心瓶中加入10mL异丙醇（4.2），用族转蒸发器（5.3）于50C水 （4.1)，均质2min，以3 000r/min离心3min.上清液倒人100mL鸡心瓶中，残渣再加人20mL乙精，浴蒸干，准确加人1mL流动相（4.6）和1mL正己烷（4.3）溶解残渣.转移至5mL离心管中，涡旋1min，以3000r/min离心3min，吸取上层正已烷弃去，再加人1mL正已烷，重复上述步骤，直至下层水相变成透明液体.按上述操作步骤制备样品空白提取液.取下层清液，过0.2um滤膜（4.10）后，用液相色谱-申联质谱仪测定.
7.2色谱测定
7.2.1液相色谱条件
a）色谱柱：Lichrospher 100 RP-18，5μm，250 mm×4.6mm（内径）或相当者；b）流动相：乙睛0.01mol/L乙酸铵溶液（1288）； c）流速：0.8mL/mind）柱温：35C；e）进样量：40pL;D）分流比：1：3.
7.2.2质谱条件
a）离子源：电喷雾离子源：b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应监测；
d）电喷雾电压：5500V；e） 气帘气压力：0.069MPa 雾化气压力：0.076MPa；g） 辅助气流速：6L/min：h) 离子源温度：350C：i）定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去额电压见表1.
表1十六种磺胺的定性离子对、定量离子对、碰擅气能量和去簇电压
中文名称 英文名称 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量/ 去额电压/215/156 (m/z) (m/z) 18 A 40硫胺醋酰 sulfacetamide 215/108 215/156 28 45磺胺甲喀二唑 sulfamethizole 271/156 271/156 20 50271/107 32 50磺胶二甲异吨唑 sulfisoxazole 268/156 268/113 268/156 20 23 45 45285/156 23 50磺胶氯哒 sulfachloropyridazine 285/108 285/156 35 50sulfadiazine 251/156 251/185 251/156 23 27 55 50254/156 23 50磺胺甲基异咳唑 sulfamethoxazole 254/147 254/156 22 45磺胶唑 sulfathiazole 256/156 256/156 22 55256/107 32 47磺胶-6-甲氧晚啶 sulfamonomethoxine 281/156 281/215 281/156 25 25 65 50磺胶甲基喀啶 sulfamerazine 265/156 265/156 25 50265/172 24 60胺邻二甲氧喀啶 sulfadoxin 311/156 311/108 311/156 31 35 70 55250/156 25 50磺胺吡啶 sulfapyridine 250/184 250/156 25 60請胶对甲氧响咬 sulfameter 281/156 281/156 25 65281/215 25 50磺胶甲氧响 sulfamethoxypyridazine 281/156 281/215 281/156 25 25 65 50磺胶二甲喀啶 279/156 22 55sulfamethazine 279/204 279/156 20 60磺胶苯吡唑 sulfaphenazole 315/156 315/156 32 55315/160 311/156 31 35 70 55磺胺间二甲氧喀啶 sulladimethoxine 311/218 311/156 27 70
