中华人民共和国国家标准
GB/T 20944.3-2008
Textiles-Evaluation for antibacterial activity-Part 3:Shake flask method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T20944《纺织品抗菌性能的评价》分为三个部分：
一第1部分：琼脂平Ⅲ扩散法；
-第2部分：吸收法；
第3部分：振荡法.
本部分为GB/T20944的第3部分.
本部分由中国纺织工业协会提出.
本部分由全国纺织品标准化技术委员会基础分委会（SAC/TC209/SC1）归口.
本部分主要起草单位：深圳市北岳海威化工有限公司、国家纺织制品质量监督检验中心、上海市纺织科学研究院南方测试中心、中国人民解放军特种防护服装质量检测中心、杭州新华诺芙特卫生材料有限公司、浙江笑雪服饰有限公司、浙江浪莎袜业有限公司、中国针织工业协会.
本部分主要起草人：邹海清、王俊起、王友斌、刘晨、张华、倪济云、李洪、盛军棋、刘爱莲、王智.
本部分首次发布.
纺织品抗菌性能的评价 第3部分：振荡法
1范围
GB/T20944的本部分规定了采用振荡法测定纺织品抗菌性能的定量试验和评价方法，
本部分适用于羽绒、纤维、纱线、织物，以及特殊形状的制品等各类纺织产品，尤其适用于非溶出型抗菌纺织产品.
本部分不涉及抗菌产品安全性的评价.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T20944的本部分的引用而成为本部分的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分.
GB/T12490纺织品色牢度试验耐家庭和商业洗涤色牢度（GB/T12490-2007 ISO105-C06：1994 •MOD)
3术语和定义
下列术语和定义适用于GB/T20944的本部分.
3. 1
抗菌性能antibacterial activity
纺织品所具有的能抑制织物上的细菌生长繁殖的性能.
3. 2
对照样controlfabric
用于验证试验微生物生长条件的、不经任何处理的100%棉织物. 注：已被证明采用色牢度试验用的棉标准贴衬织物，经高温蒸煮和蒸馏水洗涤后作为对照样是合适的.
4安全预防措施
境的危害，试验应由经过培训的人员进行. 安全须知：本试验所采用的试验菌能使人感染致病，应采取一切必要的预防措施，免除对人员和环
5原理
三角烧瓶内菌液在振荡前及振荡一定时间后的活菌浓度，计算抑菌率，以此评价试样的抗菌效果. 将试样与对照样分别装入一定浓度的试验菌液的三角烧瓶中，在规定的温度下振荡一定时间，测定
6试验器具
6.1分光光度计：检测波长475nm或660nm适合于测试试验菌液的浓度.6.2恒温培养箱：温控精度为士1℃. 6.3水浴锅：温度能保持在46C士2C.6.4恒温振荡器（摇床）：湿度精度为士1C.
GB/T 20944.3-2008
6.5冰箱：温度能保持在5C~10C.6.6玻璃门冷藏箱：温度能保持在5C~10℃.6.7高压灭菌锅：温度能保持在121C，压力能保持在103kPa. 6.8带塞三角烧瓶：容量为250mL.6.10旋涡式振动器.6.12试管、吸管、烧瓶等实验室常用器具. 6.11二级生物安全柜.
6.9培养Ⅲ：直径90mm.
7培养基和试剂
试验所用试剂应是分析纯的或适合于微生物试验用的，试验用水应是纯水，如蒸馏水.注：建议使用现有商业化的脱水原料制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明操作.
7.1营养肉汤
牛肉膏 3 g蛋白陈 5g蒸馏水 灭菌后，pH值为6.8士0.2. （最终定容至）1000-mL
7.2营养琼脂培养基
牛肉膏 3 g琼脂粉 蛋白陈 5 g 15 g蒸馏水 （最终定容至）1000mL灭菌后，pH值为6.8士0.2.
7.3沙氏琼脂培养基
葡萄糖 蛋白陈 10 g 40 g琼脂粉 20 g蒸馏水（最终定容至）1000mL灭菌后，pH值为5.6士0.2.
7.40.03mol/LPBS（磷酸盐）缓冲液
磷酸氢二钠 2.84 g磷酸二氢钾 1.36 g蒸馏水（最终定容至）1000mL 灭菌后，pH值为7.2~7.4，5C~10C保存备用.
8试验菌种
8.1菌种
革兰氏阳性细菌：金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus（ATCC6538）；
革兰氏阴性细菌：大肠杆菌Excherichia coli（8099或ATCC 11229ATCC 8739、ATCC 29522三者中的一种），或肺炎克雷白氏菌Klebsiellapnemoniae（ATCC4352），根据需要选一种；
白色念珠菌Candida albicanx（ATCC 10231）.
注1：可使用加人世界菌种保藏联合会（WFCC）的菌种保藏机构提供的、与上述菌种等效的试验菌.
注2：如果需要，可采用其他的试验菌种，培养基成分、培养温度和培养方法应根据要求调整.
8.2菌种转种及保存
冻干菌激活后接种斜面试管培养，然后贮存于冰箱（5C～10C），作为保存菌.每一个月应转种一次，转种后放于冰箱（5C～10C）保存，转种次数不应超过10代.若转种后保存时间超过一个月，不能用于下一次转种.
8.3标识
对每个菌种应标注如下信息：
a）供应冻干菌的菌种保藏机构名称：b）冻干菌的名称和编号：c）冻干菌的批号： d）冻干菌激活日期：e）保存菌的贮藏日期；f）保存菌的实验室编号.
9试验菌液的准备
9.1细菌菌液的培养和准备
9.1.1两步预培养程序制备细菌接种菌悬液
从3代~10代的细菌保存菌种（8.2）试管斜面中取一接种环细菌，在营养琼脂平板（7.2）上划线.于37C士1C，培养18h~24h，用接种环从平板中挑出一个典型菌落，接种于20mL营养肉汤（7.1）中.37C士1C，130r/min，振荡培养18h~20h.即制成了接种菌悬液.菌液含量采用分光光度计法或稀释法测定，活菌数应达到1×10CFU/mL~5×10CFU/mL.此新鲜菌液应在4h内尽快使用，以保证接种菌的活性.
9.1.2细菌接种菌液的准备
用吸管从细菌悬液（9.1.1）中吸取2mL~3mL（参考数值.由此步骤调整接种活菌数目，大肠杆菌取下限，金黄色葡萄球菌取上限），移人装有9mL营养肉汤（7.1）的试管中，充分混匀.吸取1mL移人另一支装有9mL营养肉汤（7.1）的试管中，充分混匀.吸取1mL移人装有9mL0.03mol/LPBS缓冲液（7.4）的试管中，充分混匀.吸取5mL移入装有45mL0.03mol/1.PBS缓冲液（7.4）的三角烧瓶中.充分混匀，稀释至含活菌数目3X10°CFU/mL~4X10CFU/mL（由此固定的4次稀释程序， 此接种菌液中含有微量的营养肉汤），用来对试样接种.此接种菌液应在4h内尽快使用，以保持接种菌的活性.
9.2白色念珠菌菌液的培养和准备
9.2.1两步预培养程序制备白色念珠菌接种菌悬液
从3代~10代的白色念珠菌保存菌种（8.2）试管斜面中取一接种环，在沙氏琼脂平板（7.3）上划线，于37C士1C，培养18h~24h.用接种环从平板中挑出典型的菌落，接种于沙氏琼脂培养基（7.3） 试管斜面.37C士1C，培养18h~24h.得新鲜培养物，再往此试管中加人5mL0.03mol/LPBS缓冲液（7.4）.反复吹吸，洗下新鲜菌苔，然后用5mL吸管将洗脱液移至另一支无菌试管中，用旋涡式振动器混合20或在手上振摇80次，使其充分混匀，即制成了接种菌悬液.此菌悬液含量采用分光光度计法或稀释法测定，活菌数应达到1×10°CFU/mL~5×10°CFU/ml.此新鲜菌液应在4h内尽快使用，以保证接种菌的活性.
9.2.2白色念珠菌接种菌液的准备
用吸管从白色念珠菌悬液（9.2.1）中吸取2mL~4mL，移人装有9mL0.03mol/LPBS缓冲液（7.4）的试管中，进行10倍系列稀释操作，充分混匀.吸取5mL移人装有45mL0.03mol/LPBS缓
