中华人民共和国国家标准
GB/T21174-2007
Determination of β-Lactams residues in animal derived foodRadio-receptor assay method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为规范性附录.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局.本标准主要起草人：郑品、林杰、黄晓蓉、杨方、陈彬、翁国柱、陈健.本标准系首次发布.
残留测定方法放射受体分析法 动物源性食品中内酰胺类药物
1范围
本标准规定了肉类和水产品中B-内酰胺类药物残留测定的制样和放射受体分析方法.本标准适用于肉类和水产品中P内酰胺类药物残留的筛选测定.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696：1987）
3试样制备和保存
3.1试样制备
质，充分混匀，用四分法缩分不少于500g试样.装人清洁容器内，并标明标记. 从原始样品中取出部分有代表性样品，应尽可能将脂肪剔除.将可食部分放人高速组织揭碎机均
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，用于测定的样品细菌数不能超过10°个/g
3.2试样保存
试样于-18C以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2C~6C贮存72h.
4测定方法
4.1原理
微生物细胞上的特异性受体结合.用液体闪烁计数仪测定样品中的["C]含量的计数值（cpm），计数值 测定的基础是连续性受体免疫反应，样品中残留的β内酰胺类药物和[C]标记的青霉素G分别与与样品中的β内酰胺类药物残留量成反比.
4.2试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.2.1.1阴性对照浓缩干粉：贮存于2C~6C.使用时用10mL水溶解，配制成阴性组织液.阴性组冻后的溶液可在2C~6C保存24h.
4.2.1.2MSU多种抗生素标准品：贮存于2C~6C.使用时用10mL水溶解，配制成MSU多种抗 生素标准溶液（其中青霉素G浓度为1000μg/L).MSU多种抗生素标准溶液保存方法同4.2.1.1.
4.2.1.3MSU萃取缓冲液浓缩干粉：使用时用1000mL水溶解，配制成MSU萃取缓冲液，可在
11 Charm II组织中的β-内酰胺类药物测定试剂盒和 Charm II液体闪娠计数仪是由 Charm Science 公司提供的产品的商品名.给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可.如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品.
2C~6C保存2个月.4.2.1.4M2缓冲液浓缩干粉：使用时用50mL水溶解，配制成M2缓冲液，可在2C~6C保存2个月. 4.2.1.5受体试剂片剂：绿色片剂，于一15C以下冷冻保存.4.2.1.6[C]标记的青霉素G片剂：黄色药片，于一15C以下冷冻保存.4.2.21mol/L盐酸：8.32mL浓盐酸加水定容至1000mL.4.2.3闪烁液.4.2.4pH试条. 4.2.5离心管：50mL.4.2.6硅硼酸盐玻璃试管及试管塞.4.2.7药片压杆.4.3.1CharmII液体闪烁计数仪. 4.3仪器和设备4.3.2离心机：4.000r/min4.3.3高速组织捣碎机.4.3.4涡旋混合器.4.3.6移液器：1 mL~5 mL 100 μlL~1 000 pl 4.3.5加热器：90C
5分析步骤
5.1对照液的配制
5.1.1阴性对照液的配制：取2mL阴性组织液（4.2.1.1).加人6mLMSU萃取缓冲溶液（4.2.1.3） 中混匀，制成阴性对照液该对照液可在室温下保存6h.5.1.2阳性对照液的配制：取0.3mLMSU多种抗生素标准溶液（4.2.1.2）.加人6mL阴性组织液（4.2.1.1）中混匀，然后从中取2mL混合溶液加人到6mLMSU萃取缓冲溶液（4.2.1.3）中混匀.制成阳性对照液，该对照液可在室温下保存6h.
5.2.1称取10g（精确到0.1g）均质好的试样于50mL离心管，加入30mLMSU萃取缓冲溶液（4.2.1.3），涡旋振荡5min.5.2.3吸出上清液，注意不要将漂浮的脂肪颗粒混人上清液内.恢复室温后，用pH试条检查pH是 10 min.否为7.5.如不准确，用M2缓冲液（4.2.1.4）或1mol/L盐酸调整至pH7.5，即为样品测试液，
5.3测定5.3.1用药片压杆的平编将受体试剂片剂（4.2.1.5）压入一洁净的玻璃试管内，加300μL水到试管内5.3.2用移液器加2.0mL样品测试液，或阴性对照液（5.1.1)或阳性对照液（5.1.2）到试管内.用涡 用涡旋混合器振荡10s，使药片振辞均匀.旋混合器振荡10s，上下来回10次.于55C±1C孵育2min.5.3.3从孵育器中取出试管，用药片压杆的平端压入["C标记的青霉素G片剂（4.2.1.6），用涡旋混合器振荡10s.上下来回10次.置55C±1C孵育2min.5.3.4取出试管，于3300r/min离心3min.离心停止后立即取出试管，倒掉上清液，用吸水材料吸 干管口边缘处的污渍.2
GB/T 21174-2007
再加人3mL闪烁液（4.2.3）到试管内.将试管塞盖上后，涡旋混匀.5.3.6将试管放人液体闪烁计数仪内，读[C]项的计数值.注：建议1次同时进行6支试管以下的测定.
5.4控制点的确定
5.4.1控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定.5.4.2筛选水平为25μg/kg时，控制点设定步骤：称取10g均质好的同类空白组织样品，加人0.25mLMSU多抗生素标准溶液，充分混勾制成标准样品，按5.2和5.3进行测定.测定6个非重复 的加标样品的计数值，求出平均值乘上系数1.2，即为筛选水平25pg/kg的控制点.5.4.3当筛选水平大于25ug/kg的样品时，可将样品测试液适当稀释后测定.
5.5结果判定
5.5.1当样品的计数值大于控制点时，判定为"阴性”.5.5.2当样品的计数值小于或等于控制点时，应重新测定样品，且同时需要测定阴性对照液和阳性对 照液.阴性对照液和阳性对照液的计数值，需在正常范围波动（见第A.3章）.当重新测定样品的计数值大于控制点时，判定为"阴性”；小于或等于控制点时，则判定为“初筛阳性”.
6确证
本方法为初筛方法，阳性结果应用其他方法进行确证.
7检测限
在肉类和水产品中，本方法检测限以青霉素G计β内酰胺类药物（包括青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、邻氯青霉素、双氯青霉素、头孢喀呋）总量为25μg/kg.
