中华人民共和国国家标准
GB/T21318-2007
动物源食品中硝基咪唑残留量 检验方法
Determination of nitroimidazoles residuesin foodstuffs of animal origin
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D为资料性附录.
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院.
本标准主要起草人：荣会、牟峻、张代辉、林黎明、张鸿伟、马书民、赵庆松、李晓娟、彭涛.
引言
硝基味唑类药物主要包括4-硝基咪唑、异丙硝唑、2-甲硝咪唑、洛硝哒唑、甲硝唑、氯甲硝咪唑、地美药物外，还包括代谢产物羟基甲硝唑MNZOH（甲硝唑代谢物）、羟甲基甲硝咪唑HMMNI（2-甲硝味唑、 硝唑、苯硝咪唑，是一类抗菌素和抗原虫药.硝基味唑类药物在体内吸收快，所以标示残留物除了原形洛硝哒唑代谢物），它们具有损害细菌DNA和抗厌氧菌感染的功效.该类药物主要用于治疗和预防厌氧菌引起的局部或系统感染，抑制厌氧菌的DNA合成，也用于抗滴虫和阿米巴原虫等.由于硝基味唑类药物含有的硝基杂环类化合物具有细胞诱变性，从而导致此类药物有致癌作用和潜在的致畸作用.
本标准提供了动物源食品中硝基咪唑类及代谢物的高效液相色谱/串联质谱多残留确证方法.
动物源食品中硝基咪唑残留量 检验方法
1范围
本标准规定了动物源性食品中硝基咪唑原药8种、代谢产物2种残留量的高效液相色谱/申联质谱测定方法.
硝唑、2-甲硝味唑、洛硝哒唑、甲硝唑、氯甲硝咪唑、地美硝唑、苯硝咪唑残留量及其代谢物羟基甲硝唑 本标准适用于猪肉、鸡肉、牛肉、猪肝、鸡肝、牛肝、猪肾、牛肾、鱼肉、奶粉、蜂蜜中：4-硝基味唑、异丙MNZOH（甲硝唑代谢物）、羟甲基甲硝咪唑HMMNI（2-甲硝味唑、洛硝哒唑代谢物）的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992 neqISO3696：1987)
3原理
样品中残留的8种硝基咪唑、2种代谢物用甲醇-丙酮均质或超声波提取，经乙酸乙酯液液分配，以
4试荆和材料
除非另有说明，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1甲醇：HPLC级.4.3乙酸乙酯：HPLC级. 4.2丙酮：HPLC级.4.4环已烷：HPLC级.4.5氯化钠.4.6无水硫酸钠：经650C灼烧4h，贮于密封容器中备用.4.7甲酸：优级纯.4.8饱和氯化钠水溶液， 4.9硅藻土：80目~120目.4.10C固相萃取柱：1.0g，6mL.4.11微孔滤膜：有机系.0.45gm.4.12硝基咪唑原药8种、代谢产物2种标准物质：纯度均大于等于98%（详见附录A）.4.13标准储备液：分别准确称取适量的每种标准物质，用甲醇配制成浓度为1000μg/mL的标准储 备液.该溶液应配制于棕色容量瓶中，在0C～4C冰箱中可保存12个月.4.14混合中间标准溶液：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，用甲醇稀释成适当浓度的混合中
间标准溶液.该溶液应配制于棕色容量瓶中，在0C～4C冰箱中可保存6个月.
GB/T 21318-2007
4.15混合标准工作溶液：分别准确移取一定体积的混合中间标准溶液，可根据需要用甲醇稀释成适当浓度的混合标准工作溶液.该溶液应配制于棕色容量瓶中，在0C～4C冰箱中可保存3个月.
5仪器和设备
5.1液相色谱-中联质谱仪：配电喷雾离子源中联四极杆检测器.5.2凝胶色谱仪：配有错份收集浓缩器.5.3组织捣碎机.5.4均质器.5.5超声波发生器.5.7高速离心机. 5.6旋转蒸发器.5.8氮吹仪.5.9具塞锥型瓶：250mL.5.10分液漏斗：250ml.5.11浓缩瓶：50mL 250mL.
6试样制备与保存
6.1肌肉组织及器脏组织类、水产品类
从原始样品中取出有代表性样品（脏器应剔除筋膜）约500g，用组织搞碎机充分接碎混匀，均分成两份，分别装入洁净的容器作为试样，密封并标明标记，将试样置于一18C冷冻避光保存.
6.2乳及乳制品类
从原始样品中取出有代表性样品约500g，用组织接碎机充分鹅碎混匀，均分成两份，分别装入洁净的容器作为试样，密封并标明标记将试样置于4C冷藏避光保存.
6.3蜂蜜
从原始样品中取出有代表性样品约200g，对无结品的蜂蜜样品用组织揭碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净的容器作为试样，密封并标明标记，将试样置于4C冷藏避光保存：对有结品析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过60C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后用组织 搞碎机充分搞碎混匀，均分成两份，分别装人洁净的容器作为试样，密封并标明标记，将试样置于4C冷藏避光保存.在融化时应注意防止水分挥发.
在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化.
7样品处理
7.1提取
7.1.1肌肉组织、脏器组织样品及水产品
准确称取约20g样品（精确至0.1g）于250mL具塞锥形瓶中，加人10g硅藻土（4.9）与样品充分混匀，再依次加人5mL饱和氯化钠水溶液和70mL甲醇-丙酮（31），高速均质提取3min.将提取液移人离心管中，于10000r/min条件下离心2min.将上层提取液移人250mL浓缩瓶中，残渣每次再用50mL甲醇-丙酮（31）重复提取两次，合并提取液.
7.1.2蜂蜜、乳及乳制品样品
分别准确称取约20g样品（精确至0.1g）于250mL具塞锥形瓶中.加人10mL饱和氯化钠水溶液和70mL甲醇-丙酮（31），超声波提取30min.移人离心管中，于10000r/min条件下离心2min，2
