中华人民共和国国家标准
GB/T 22262-2008
Determinationofclopidolinfeeds-High performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口.本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心（北京）].
本标准主要起草人：索德成、李兰、魏书林.
饲料中氯羟吡啶的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了高效液相色谱仪测定饲料中氯羟吡啶的方法.本标准适用于配合饲料、预混合饲料及浓缩饲料中氯羟吡啶的测定.方法最低定量限为1mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992 neqISO3696：1987)GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
色谱系统中进行分离，用紫外检测器进行测定. 试样中氯羟吡啶经甲醇提取，用氧化铝柱净化分离，浓缩后用甲醇溶解，注入高效液相色谱仪反相
4试剂和溶液
除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级用水.
4.1乙晴：色谱纯. 4.2甲醇.4.3流动氧化铝（中性，层析用）：粒度150μm~75μm，在800C灼烧3h，并在130C烘箱中烘烤1h后，放人干燥器中备用.4.4氯羟吡啶标准品：纯度均应大于95%.4.5氯羟吡啶标准溶液 4.5.1氯羟晚啶标准贮备液：分别准确称取已知纯度的氯羟吡啶标准品10mg（精确至0.0001g），置于100mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.2）超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀.该溶液中氯羟吡啶浓度为100pg/mL，于4C保存可使用6个月.4.5.2氯羟吡啶标准工作液：准确移取氯羟吡啶5mL，置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度，该溶液中氯羟吡啶浓度均为10μg/mL，于4C保存可使用1个月.
5仪器和设备
除实验室常用仪器和设备外，还包括以下仪器和设备.
5.1电子天平：精度为0.0001g.5.2振荡器. 5.3高效液相色谱仪：配二极管矩阵检测器或紫外检测器.5.4滤膜：孔径为0.45jm
5.8氧化铝净化柱：长度200mm.内径10mm玻璃柱.柱底部装有G4砂芯板，装人氧化铝约10cm 5.7涡轮混合器：2500r/min.的高度，使用前用20mL甲醇淋洗.
5.5离心机：5 000 r/min.
5.6旋转蒸发器：50C.
6试样的选取和制备
6.1按GB/T14699.1采样.
7分析步骤
7.1试液的制备
7.1.1提取
准确称取配合饲料5g~10g或浓缩饲料1g~5g、复合预混合饲料1g~5g（精确至0.001g)，于50mL离心管中，加人甲醇25mL，旋涡混合，于振荡器振荡30min，3000r/min离心5min 取上清液备用.
7.1.2净化
准确吸取上清液10mL.移人氧化铝净化柱中，用10mL甲醇洗柱内壁.将过柱溶液及洗脱液全部接收于旋转蒸发瓶中，用50C水浴的旋转蒸发器将溶剂蒸干.用1mL甲醇溶解残渣，过0.45gmm的滤膜，滤液进液相色谱仪检测.
7.2测定
7.2.1液相色谱条件
色谱柱：具有C填料的柱子（粒度为5μm），柱长150mm，内径4.6mm.流动相：乙睛水=1090（体积比），以1.0mL/min流速洗脱.检测器：二极管矩阵检测器或紫外检测器，检测波长为270nm.
7.2.2定量测定
按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数.向液相色谱柱中注人待测定氯羟毗啶标准工作液（4.5.2）及试液（7.1），得到色谱峰面积响应值，用外标法定量.
7.2.3结果计算
试样中氯羟吡啶的含量X以质量分数（mg/kg）表示，按式（1）计算：
式中：
P一试样溶液峰面积值；V样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）；（标准溶液浓度，单位为微克每毫升（gg/mL）；V-标准溶液进样体积，单位为微升（uL）； P-标准溶液峰面积平均值：m-试样质量，单位为克（g）；V试样溶液进样体积，单位为微升（gL）.平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字.
8重复性
同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%.
图A.1氯羟哦啶标准溶液色谱图
