中华人民共和国国家标准
GB/T 22941-2008
蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、 替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、 吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of linycin，erythromycin，spiramycin，tilmicosin tylosin，josamycin，kitasamycin oleandomycin residues in honey-LC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局.本标准主要起草人：曹彦忠、张艳梅、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳.
蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、 替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、 吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法.
本标准适用于蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定.
本标准的方法检出限均为2.0pg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-2004 ISO 5725-1;1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，1SO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987.MOD）
3原理
蜂蜜中残留的林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素用三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲溶液（pH=9）提取，过滤后，经OasisHLB固相萃取柱或相当的固相萃取柱净化.用甲醇洗脱并蒸干，残渣用乙晴-0.01mol/L.乙酸铵溶液溶解过0.2μm滤膜后，样品溶液 供液相色谱-申联质谱仪测定，内标法定量.
4试剂和材料
4.1水：GB/T6682，一级.4.2甲醇：色谱纯. 4.3乙睛：色谱纯.4.4三羟甲基氨基甲烷（Tris）：优级纯.4.5氯化钙（CaCl2HO）：优级纯.4.6乙酸铵：优级纯.
1）Oasis HLB 医相萃取柱是Waters公司产品的商品名称-给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可.如果其他等效产品具有相同的效果.则可使用这些等效产品.
4.7盐酸：优级纯.4.8淋洗液：甲醇溶液（23）.量取40mL甲醇（4.2）与60mL水混合.4.90.01mol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵（4.6）溶于1000mL水中.4.100.2mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲溶液：称取12.0g三羟甲基氨基甲烷（4.4）和7.35g 氯化钙（4.5），放人1000mL烧杯中，加人800mL水溶解，用盐酸（4.7）调至pH值为9.0，再用水定容至1 000 mL.4.11定容液：乙-0.01mol/1乙酸铵溶液（317）.量取15mL乙睛（4.3）和85mL乙酸铵溶液（4.9）混合均匀.4.12标准物质：林可霉素（CAS:7179-49-9）、红霉素（CAS：59319-72-1)、螺庭霉素（CAS：8025-81-8）、(CAS：1392-21-8）、竹桃霉素（CAS：7060-74-4），纯度≥99%. 替米考星（CAS：108050-54-0）、泰乐菌素（CAS：74610-55-2）、交沙霉素（CAS：16846-24-5）、吉他霉素4.130.1mg/mL标准储备溶液：准确称取适量的各标准物质（4.12），用甲醇分别配成0.1mg/mL的标准储备溶液.该溶液在4C保存.4.141.0μg/mL混合标准工作溶液：吸取各标准储备溶液（4.13)0.1mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度.该溶液在4C保存. 4.15内标物质：罗红霉素（CAS：80214-83-1）、克林霉素（CAS：21462-39-5），纯度≥99%.4.160.1mg/mL.罗红霉素、克林霉素内标储备溶液：准确称取适量的罗红霉素、克林霉素标准物质（4.15），用甲醇配成0.1mg/mL的内标储备溶液.该溶液在4C保存.4.171.0μg/mL混合内标工作溶液：分别吸取罗红霉素和克林霉素内标储备溶液（4.16）0.1mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度.该溶液在4C保存.4.18基质标准工作溶液：吸取不同体积混合标准工作溶液（4.14）和20gL混合内标工作溶液（4.17）， 用空白样品提取液配成2. 0ng/mL、5. 0ng/mL、10.0 ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL不同浓度的基质标准工作溶液.当天配制.4.19OasisHLB固相萃取柱或相当者；200mg，6mL.使用前依次用5mL甲醇（4.2）和10mL水活化，保持柱体湿润.4.20滤膜；0.2um.
5仪器
5.1液相色谱-中联质谱仪：配有电喷雾离子源.5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g.5.3氮气浓缩仪.5.5贮液器：50mL 5.4液体混匀器.5.6真空泵：最大负压80kPa.5.7固相萃取装置.5.8吹干管：10mL.
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
对无结品的实验室样品，将其搅拌均匀，对有结品的样品，在密闭情况下，置于不超过60C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温.分出0.5kg作为试样.制备好的试样置于样品瓶
中，密封，并做上标记.
6.2试样保存
将试样于常温下保存.
7测定步骤
7.1提取
称取2g试样，精确至0.01g.置于150mL三角瓶中，加人20μL混合内标工作溶液（4.17），加人25 mLTris缓冲溶液（4.10），于液体混匀器（5.4）上快速混匀1min，使试样完全溶解.
7.2净化
将塞有玻璃棉的玻璃贮液器（5.5）连到OasisHLB固相萃取柱（4.19）上.把样液倒人玻璃贮液器中，调节流速小于3mL/min.待样液完全流出后，依次用5mL水和5mL淋洗液（4.8）洗柱-弃去全部流出液.减压抽干20min，然后用5mL甲醇（4.2）洗脱，收集洗脱液于10mL吹干管（5.8）中.用氮气浓缩仪（5.3）于50C吹干.准确加人1.0mL定容液（4.11）溶解残渣，过0.2xm滤膜后，供液相色谱-申联质谱仪测定.
按上述操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的样品空白提取液.
7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：AtlantisC，3μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者；b）流速：0.2mL/min;c）柱温：30C；e）流动相：A：乙腊，B：0.1%甲酸溶液，C：甲醇.梯度洗脱条件见表1. d）进样量：20yL;
表1梯度洗脱条件
时间/min A/% B/% C/%0 00 90 0 5 0 5.05 00 5 0 90 0 5.09 00 5 0 90 0 5 09 10 90 0 5 0 5.017.0 90 0 5.0 5.0
7.3.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源；b）扫描方式：正离子扫描；c） 检测方式：多反应监测：d）电喷雾电压：5500V；e）雾化气压力：0.069MPa; 气帘气压力：0.069MPa；g）辅助气流速：7L/min;h）离子源温度：450C；i）定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2.
