中华人民共和国国家标准
GB/T22947-2008
Determination of 18 sulfonamides residues in royal jellyLC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局.
本标准主要起草人：贾光群、曹彦忠、张进杰、王占英、石玉秋、姚智慧、庞国芳.
蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了蜂王浆中十八种磺胺类药物（见表2）残留量液相色谱-串联质谱测定方法.本标准适用于蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定. 本标准的方法检出限均为5.0pg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-2004 IS 5725-1:1994 IDT)
性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，1SO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987，MOD）
3原理
交换柱或相当的固相萃取柱净化，用氨水-甲醇溶液（119）洗脱并蒸干，残渣用乙晴-0.01mol/L乙 蜂王浆中磺胺类药物残留用去离子水提取，三氯乙酸沉淀蛋白，离心后，上清液经OasisMCX离子酸铵溶液溶解，过0.2um滤膜后，样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量.
4试荆和材料
4.1水：GB/T6682，一级. 4.2甲醇：色谱纯.4.3乙晴：色谱纯.4.4乙酸铵：优级纯.4.5三氯乙酸：优级纯. 4.6甲酸：优级纯.4.7氨水：分析纯.4.80.01mol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵（4.4）溶于1000mL水中.4.92%甲酸溶液：吸取2mL甲酸（4.6），用水稀释至100ml.4.11氨水-甲醇溶液（119）：吸取5mL氨水（4.7）与95mL甲醇（4.2）混合均匀. 4.1050%三氯乙酸溶液：称取20g三氯乙酸（4.5）溶于20mL水中.4.12乙睛-0.01mol/L乙酸铵溶液（322）:量取12mL乙睛（4.3）与88mL乙酸铵溶液（4.8）混合均匀.
GB/T 22947-2008
4.13八种磺胺类药物标准物质：磺胺喀啶（CAS:68-35-9）、磺胺噻唑（CAS:72-14-0）、磺胺吡啶（CAS：144-83-2）、磺胺甲基嘧啶（CAS：127-79-7）、磺胺间甲氧嘧啶（CAS：1220-83-3）、磺胺甲噻二唑（CAS：144-82-1）、磺胺二甲啶（CAS57-68-1）、磺胺甲氧哒嗪（CAS：80-35-3）、磺胺对甲氧喀啶（CAS：651-06-9）、磺胺氯嗪（CAS：80-32-0）、磺胺甲基异呕唑（CAS：723-46-6）、磺胺邻二甲氧磁啶 （CAS：2447-57-6）、磺胺二甲异噻唑（CAS：127-69-5）、磺胺苯酰（CAS：127-71-9）、磺胺氯吡嗪（CAS：102-65-8）、磺胺苯吡唑（CAS：526-08-9）、磺胺间二甲氧密啶（CAS：1037-50-9）、磺胺唑螺啉（CAS：59-40-5).纯度≥99%.4.155.Oμg/mL磺胺混合标准工作溶液：分别吸取各标准储备溶液（4.14）0.5mL移至10ml容量 0.1mg/mL的标准储备溶液.该溶液在4C保存.瓶中，用甲醇稀释成5.0yg/mL.混合标准工作溶液.该溶液在4C保存.4.16磺胺内标物质：磺胺甲基异恶唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4.纯度≥99%.4.170.1mg/mL磺胺甲基异咳唑-D4、磺胺密啶-D4、磺胺噻唑-D4内标储备溶液：称取适量磺胺甲基异唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺唑-D4标准物质（4.16）.用甲醇分别配成0.1mg/mL的内标储备溶4.18混合内标工作溶液：分别吸取磺胺甲基异晒唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4储备溶液（4.17） 液.该溶液在4C保存.各0.5mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度.该溶液在4C保存.4.19基质标准工作溶液：吸取不同体积标准工作溶液（4.15）和20L混合内标工作溶液（4.18），用空白样品提取液配成5.0 ng/mL、10.0ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL不同浓度的基质标准工作溶液.当天配制.4.20OasisMCX柱或相当者：150mg.6ml.用前依次用5mL甲醇（4.2）和10mL水处理.保持柱 体湿润.4.21混膜：0.2 yum.
5仪器
5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g. 5.1液相色谱中联质谱仪：配有电喷雾离子源.5.3具塞的聚丙烯试管：50ml5.4振荡器.5.5液体混匀器.5.6固相萃取装置，5.7玻璃贮液器：50ml. 5.8氮气浓缩仪.5.9浓缩管：10mL.
6试样制备与保存
6.1试样的制备
品瓶中，密封，并做上标记. 对于冷冻的实验室样品，待其解冻后将其搅拌均匀.分出0.5kg作为试样.制备好的试样置于样
6.2试样的保存
将试样于一18C冷冻保存.
7测定步骤
7.1提取
（4.18），然后加人20mL水，于液体混匀器（5.5）上快速混匀1min.再置于振荡器（5.4）上振荡提取角瓶中，再向残渣中加入15mL水，重复上述步骤，合并上清液，待净化.
7.2净化
将塞有玻璃棉的玻璃贮液器（5.7）连到OasisMCX柱（4.20）上，把上清液（7.1）倒人玻璃贮液器中，调节流速小于3mL/min，待样液完全流出后，依次用5mL甲酸溶液（4.9）和5mL甲醇（4.2）洗柱，弃去全部流出液.最后用5mL氨水-甲醇溶液（4.11）洗脱，收集洗脱液于10mL浓缩管（5.9）中.用氮气浓缩仪（5.8）于50C吹干.准确加入1.0mL乙晴-0.01mol/L乙酸铵溶液（4.12）溶解残渣，样液过0.2um滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定.
按上述操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的空白样品提取液.
7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Atlantis Cs，3μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者；b）流动相：A：乙晴，B：0.1%甲酸水溶液，C：甲醇，梯度洗脱条件见表1； c）流速：0.2mL/min；d）柱温：35C；e）进样量：20pl.
表1流动相梯度表
时间/min A/% B/% %730 00 10 0 80 0 10 03 00 20 0 70 0 10 08 00 35 0 55 0 10 012 00 70 0 20. 0 10 012 01 10 0 80 0 10 017 00 10.0 80 0 10 0
7.3.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源； b）扫描方式：正离子扫描：c）检测方式：多反应监测；d）电喷雾电压：5500V；e）雾化气压力：0.076MPa；g）辅助气流速：6L/min; f) 气帘气压力：0.069MPa;h）离子源温度：350C；i）定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2.
