中华人民共和国国家标准
GB/T22950-2008
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中12种β-兴奋剂 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of 12 β-agonists residues in fugu.eel and baked eelLC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.
本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口，
本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局、食品安全分析与检测技术教育部重点实验室（福州大学）.
本标准主要起草人：杨方、刘正才、林永辉、李罐平、余孔捷、黄杰、陈健、陈国南、庞国芳.
河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中12种β-兴奋剂 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了河原鱼、鳗鱼和烤鳗中12种β兴奋剂残留量的液相色谱-中联质谱测定方法.
本标准适用于河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中12种β兴奋剂多残留的测定.12种B-兴奋剂药物包括澳布特罗（brombuterol）、塞曼特罗（cimaterol）、克仑特罗（clenbuterol）、克仑潘特（clenpenterol）羟甲基氨 克仑特罗（hydroxymethylelenbuterol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、马布特罗（mabuterol）、莱克多巴胶（ractopamin）、利托君（ritodrine）、沙丁胺醇（salbutamol）、特布他林（terbutaline）和妥布特罗(tulobuterol) .
本标准中莱克多巴胺、沙丁胺醇、塞曼特罗、克仑潘特和克仑特罗的方法检出限为0.1pug/kg，溴布0.5 μg/kg. 特罗、妥布特罗、马布特罗、特布他林、利托君、苯氧丙酚胺和羟甲基氨克仑特罗的方法检出限为
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-2004 ISO) 5725-1: 1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2；1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987，MOD)
3原理
阳离子交换反相吸附固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱进行测定，内标法定量. 样品经稀酸水解、高氯酸沉淀蛋白后，残留的B兴奋剂以乙酸乙酯与异丙醇混合溶剂萃取，混合型
4试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1甲醇：色谱纯. 4.2异丙醇.4.3乙酸乙酯.4.4乙晴：色谱纯.4.5甲酸， 4.6高氯酸.4.7盐酸.4.8氢氧化钠，
4.9乙酸铵：色谱纯.4.10氨水.4.11氯化钠.混匀混匀.莱克多巴胺、利托君、沙丁胺醇、特布他林和妥布特罗，纯度大于98.0%.4.18内标标准物质：盐酸克仑特罗-D9、盐酸莱克多巴胺-D5、沙丁胺醇-D3，纯度大于98.0%.4.19标准储备液（100pg/mL)：准确称取适量（精确到0.1mg）的澳布特罗、塞曼特罗、克仑特罗、克仑潘特、羟甲基氨克仑特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、莱克多巴胺、利托君、沙丁胺醇、特布他林和妥布特4.20混合标准储备液（1μg/mL）：分别准确量取1.0mL的标准储备液至100mL容量瓶中，用甲醇 罗，用甲醇分别配制成100μg/mL的标准储备液，一20C冰箱中保存.稀释至刻度，一20C冰箱中保存.4.21内标储备液（100μg/mL）：准确称取适量（精确到0.1mg）的克仑特罗-D9、莱克多巴胺-D5、沙丁4.22内标工作液（10ng/mL）：分别准确量取适量的同位素内标储备液至同一容量瓶中，用甲醇稀释 胺醇-D3对照品.用甲醇配制成100pg/mL的标准储备液.定容成浓度为10ng/mL的同位素内标工作液，一20C下冰箱中保存.4.24混合型阳离子交换反相吸附固相萃取柱：60mg/3mL，使用前依次用3mL甲醇和3mL水活 现配.化，保持柱体湿润.4.25滤膜：0.2ym.
4.1210mol/L氢氧化钠溶液：称取40g氢氧化钠至100mL水中，混匀.4.130.1mol/L高氯酸溶液：移取0.4mL高氯酸至100mL水中，混匀.4.140.1mol/L盐酸溶液：移取0.85mL盐酸至100mL水中，混匀.4.155mmol/L乙酸铵溶液：称取0.385g乙酸铵至约800ml水中.加人2mL甲酸，定容至1000ml，4.16甲醇-0.1%甲酸溶液：移取0.1mL甲酸于约50mL水中，加人10mL甲醇，以水定容100mL，4.17标准物质：澳布特罗、塞曼特罗、克仑特罗、克仑潘特、羟甲基氨克仑特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、4.23基质标准工作溶液：以空白基质溶液将混合标准储备液与内标工作液稀释至适当浓度，临用
5仪器和设备
5.1高效液相色谱-中联质谱仪：配电喷雾电离（ESI）源.5.2天平：感量0.1mg和0.01g.5.3组织捣碎机.5.5离心机：4000r/min 5.4高速冷冻离心机：转速可达15000r/min，致冷可达4C.5.6旋涡振荡器.5.7电热恒温振荡水槽.5.8pH计. 5.9旋转蒸发仪.5.10固相萃取装置.5.11氮吹仪.
6试样制备和保存
河豚鱼、鳗鱼取连皮的鱼肉，将皮、肉分离后取鱼皮置于微波炉中加热后连同鱼肉、鳗鱼制品取2
可食部分一并放人组织捣碎机均质，充分混匀，装入清洁容器内，并标明标记.
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.2试样保存
试样于-18C以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2C~6C贮存72h.
7测定步骤
7.1提取
物，加人20mL0.1mol/L盐酸溶液（4.14），误旋混匀，于37C下避光水浴振荡16h（过夜），取出冷却 准确称取5g（精确到0.01g）测试样品于50mL聚丙烯离心管内，加入50L10ng/mL的内标至室温，加人5mL0.1mol/L高氯酸溶液（4.13）.涡旋混匀，4C下15000r/min离心10min，分取10 mL上清液转移至另一50mL 离心管内.用10mol/L氢氧化钠溶液（4.12）调节pH值至9.7±5min，取出上清液至另一50mL离心管中.再在下层水相中加15mL乙酸乙酯-异丙醇（73），涡动溶液（4.14），涡动1min，待净化.
7.2净化
将7.1所得溶液以约1mL/min的流速全部过混合型阳离子交换反相吸附固相萃取柱（4.24）.依次用3mL水、3mL2%甲酸水溶液和2mL甲醇淋洗，抽干.用5mL5%氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液于 40C下以氮气吹至近干，以0.5mL甲醇-0.1%甲酸溶液（4.16）溶解，误动混匀，过0.2μm滤膜（4.25），供液相色谱-中联质谱仪测定.
7.3空白基质溶波的制备
称取阴性样品5g（精确至0.01g），按7.1和7.2步骤操作.
7.4液相色谱-串联质谱测定
7.4.1液相色谱条件
a）色谱柱：Acquity UPLC BEH C，1.7μm，55mm×2.1 mm（内径）或相当者；b）流动相：A为5mmol/L乙酸铵溶液（4.15），B为0.1%甲酸乙睛，梯度洗脱，洗脱程序见表1；
表1梯度洗脱程序
时网/min A/% B/%0 0 85 151.0 85 152.0 30 30 70 702.5 3 0 85 155 0 85 15
c)流速：0.25 mL/min;d）柱温：30C；e）进样量：10p.
7.4.2质谱条件
a）离子源：电喷雾源（ESI），正离子模式：b）扫描方式：多反应监测（MRM）：c）毛细管电压：1.5kV；
