中华人民共和国国家标准
GB/T 22960-2008
河豚鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、 头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹污 残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of cefazolin cefapirin cephalexin.cefalonium.cefquinome residues in fugu and eelLC-MS-MS method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局.本标准主要起草人：李学民、王贺琴、母健、曹彦忠、刘晓茂、庞国芳.
河豚鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、 头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肪 残留量的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了河原鱼和鳗鱼中头孢唑啉、头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肪残留量的液相色谱-申联质谱测定方法.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义（GB/T6379.1一2004 ISO 5725-1:1994 IDT)
性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT）
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696:1987，MOD）
3原理
定，外标法定量. 试样中五种头孢菌素药物残留用乙晴提取，旋转蒸发除去乙睛，用水定容，液相色谱-申联质谱仪测
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯.
4.1水：GB/T6682，一级. 4.2甲醇：色谱纯.4.3乙晴：色谱纯.4.4乙酸.4.5正已烷.静置分层后，弃掉乙.4.7标准物质：头孢唑啉（CAS:25953-19-9）、头孢匹林（CAS：24356-60-3）、头孢氨苄（CAS：16549-56-7）、头孢洛宁（CAS：5575-21-3）、头孢喹（CAS118443-89-3），纯度≥99%4.81.0mg/mL五种头孢菌素标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质（4.7）.分别用水配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液.储备液贮存在一18C冰柜中. 4.9五种头孢菌素标准混合工作溶液：根据需要吸取适量的每种头孢菌素标准储备溶液（4.8），用水稀
释成适当浓度的标准混合工作溶液.
4.10滤膜：0.2m
5仪器
5.1液相色谱-中联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源.5.2分析天平：感量0.1mg，0.01g.5.3均质器.5.4微量注射器：25gL 100al.5.5刻度样品管：5mL，精度为0.1mL 5.6高速冷冻离心机：带有50mL具塞离心管，转速达到10000r/min以上.5.7氮气浓缩仪.
6试样制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内.密封后作为试样，标明标记.在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.2试样的保存
将试样于-18C保存.
7测定步骤
7.1试样溶液的制备
质1min，提取液使用高速冷冻离心机（5.6）在10C，10000r/min离心10min.把上层提取液移至另一 称取5g试样（精确到0.01g）置于50mL离心管中，加人20mL乙（4.3），使用均质器（5.3）均离心管中.用15mL乙晴重复提取一次，合并两次的提取液，并加人10mL乙腊饱和的正已烷（4.6），振荡1min，弃掉正已烷.把提取液移至100mL鸡心瓶中，在40C旋转蒸发除去乙晴，用2mL水溶解残渣，摇匀后，样液过0.2pm滤膜（4.10），供液相色谱-串联质谱仪测定.
7.2空白样品添加标准混合工作溶液的制备
分别准确移取适量五种头孢菌素标准混合工作溶液（4.9），添加到5.0g样品中，按照7.1步骤操作，制得头孢唑琳浓度分别为 10μg/kg、20μg/kg、40μg/kg、100 μg/kg；头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢唑肪浓度分别为2.0μg/kg、4.0pg/kg、8.0μg/kg、20pg/kg四个样品添加标准混合工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定.
7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：ZORBAX SB-Cs，3.5 pm150mm×2.1mm（内径）或相当者；b）流动相组成、流速及梯度程序见表1；d）进样量：20gL. c）柱温：30C；
表1流动相梯度程序及流速
时间/min 流速/50允许的量大偏差 相对离子丰度K ±20 20<K<50 ±25 10<K<20 ±30 K≤10 ±50 7.4.2定量测定 用7.2制备的空白样品添加标准混合工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线.用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中五种头孢菌素的响应值均
