中华人民共和国国家标准
GB/T22966-2008
牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量 的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of sixteen sulfonamide residues in milk and milk powder-LC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国河北出人境检验检 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口.疫局.
本标准主要起草人：吕红英、段文仲、陈瑞春、郭春海、艾连峰、贾海涛、窦彩云、马育松、庞国芳.
牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量 的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛奶和奶粉中16种磺胺类药物（见表2）残留量液相色谱-质谱/质谱测定方法.
本标准适用于牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定.
本标准的方法检出限：牛奶中磺胺醋酰、磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺6-甲氧嗜啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹螺啉、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲曝二唑、甲氧苄氨壁啶和磺胺二甲异唑等16种磺胺类药物残留量的方法检出限均为1.0μg/kg：奶粉中磺胺醋酰、磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧密啶、磺胺氯胺噻唑、磺胺甲曝二唑、甲氧苄氨嘧啶和磺胺二甲异曝唑等16种磺胺类药物残留量的方法检出限均为 哒嗪、磺胺甲基异噬唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹啉、磺胺嘧啶、磺4. 0 μg/kg.
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总期与定义（GB/T6379.1一2004 1SO 5725-1:1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987，MOD）
3原理
用高氯酸溶液提取试样中磺胺类药物残留，OasisHLB固相萃取柱"净化，甲醇洗脱，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1高氯酸.4.2甲醇：色谱纯.4.3乙酸：色谱纯.4.4高氯酸溶液：pH=2.1000mL水中加人1mL高氯酸，再用水调至pH=2. 4.50.1%乙酸溶液：100mL水中加人0.1mL乙酸（4.3）.4.6甲醇-乙酸溶液（119）：量取50mL甲醇（4.2）与950mL乙酸溶液（4.5）混合.4.7磺胺醋酰、磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异
1）Oasis HLB 国相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果.则可使用这些等效产品.
唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺-6-甲氧密啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹啉、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、甲氧苄氨嘧啶和磺胺二甲异唑标准物质：纯度≥95%.0.1mg/mL的标准储备溶液.该溶液在4C保存. 4.80.1mg/mL16种磺胺类药物标准储备溶液：准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成4.91pg/mL磺胺类药物混合标准中间溶液：分别吸取1mL标准储备溶液（4.8）移至100mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度.该溶液在4C保存.4.10基质混合标准工作溶液：根据每种磺胺类药物的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度（ng/mL)的基质混合标准工作溶液.基质混合标准工作溶液在4C保存. 4.11OasisHLB固相萃取柱或相当者：60mg3mL.使用前在柱上塞上一小块脱脂棉，再分别用3 mL甲醇和5mL高氯酸溶液（4.4）活化：保持柱体湿润.4.12滤膜：0.2 yum.
5仪器
5.1液相色谱-中联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源.5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g.5.3超声波萃取仪.5.4涡旋振荡器. 5.5固相萃取装置.5.6氮气吹干仪.5.7真空泵.5.8pH计：测量精度士0.02pH单位，5.9贮液器：通过转接头连接于OasisHLB固相萃取柱上. 5.1010mL具刻度离心管.
6试样的制备与保存
将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇匀，备用.
6.2试样保存
牛奶置于4C冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存.
7测定步骤
7.1提取
7.1.1牛奶
称取2g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，加人25mL高氯酸溶液（4.4），涡旋振荡器振荡提取1min，超声波萃取10min.
7.1.2奶粉
称取0.5g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，加人25mL高氯酸溶液（4.4），于涡旋振荡器振荡提取1min.超声波萃取10min.
7.2净化
将7.1的溶液全部转移到储液器中，再用5mL高氯酸溶液（4.4）洗离心管，洗液合并到贮液器，以3mL甲醇洗脱于10mL具刻度离心管中，洗脱液于40C用氮气吹至约0.2mL时停止浓缩，用甲醇- 约1mL/min的流速全部过HLB固相萃取柱（4.11），待样液完全流出后，用5mL水淋洗柱，抽干.用乙酸溶液（4.6）补至1mLl.旋涡混匀，过0.2um滤膜，供液相色谱串联质谱分析.
7.3空白基质溶液的制备
取牛奶阴性样品2g，奶粉阴性样品0.5g，按7.1和7.2操作.
7.4测定条件
7.4.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：C，5pm，150mm×2.1mm（内径）或相当者：b) 色谱柱温度：30C：c) 进样量：10L;d) 流动相梯度及流速见表1.
表1液相色谱梯度洗脱条件
时间/min 流速/（lL/min） 0.1%乙酸水溶液/% 甲醇/%0 00 200 75 255.00 200 55 458 00 200 20 8010 00 200 20 8010 10 200 75 2513 00 002 75 25
7.4.2 质谱参考条件
离子化模式：电喷雾正离子模式（ESI）；b) a) 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）；c) 鞘气压力：104kPa；d) 辅助气压力：138kPa；e) 毛细管温度：320C； 正离子模式电喷雾电压（IS）：4000V；f) 源内诱导解离电压：10V：h) Q1，Q3分辨率：Q1为0.2 Q3为0.7：i) 碰撞气：高纯氢气：k）其他质谱参数及16种磺胺类药物的CAS编号、保留时间见表2. j) 碰撞气压力：0.2Pa；
表2 16种磺胺类药物的CAS编号、定性离子对、定量离子对和碰撞能量
化合物中文名称 保留时间/ CAS编号 定性离子对 定量离子对 碰撞能量/化合物英文名称 min (n/≥) （m/≥） eV硫胺酰酰 sulfacetamide 3 74 144-80-9 215 05/155 91 251 05/155 91 10215 05/107 98 22甲氧苄氨喀啦 trimethoprin 4 66 23256-42-0 291 14/229 94 291 14/260 90 291 14/229 94 25 21硫胶嗜啶 sulfadiazine 4 56 68-35-9 251 05/155 96 251 05/107 97 251 05/155 96 18 25256 02/155 99 16硫胶嘧唑 sulfathiazole 4 84 72-14-0 256 02/108 05 256 02/155 99 22
