中华人民共和国国家标准
GB/T23224-2008
Identification of cultivar resistance to tobacco disease
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准由国家烟草专卖局提出.本标准由全国烟草标准化技术委员会（SAC/TC144）归口. 本标准起草单位：中国烟草总公司青州烟草研究所.本标准主要起草人：孔凡玉、王风龙、张成省、钱玉梅、王静、陈德鑫、申莉莉.
烟草品种抗病性鉴定
1范围
本标准规定了烟草品种对由病原真菌、细菌、病毒和根结线虫等引起的主要病害的抗病性鉴定及抗性评价方法.
本标准适用于各类型烟草品种的抗病性鉴定.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T23222烟草病虫害分级及调查方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准.
3.1
致病性分化variation ofpathogenicity
差异. 病原物由于突变、杂交、适应性变异、不同孢子细胞质的异质性等致使生理小种改变，导致致病性
3.2
人工接种鉴定artificial inoculation for identification
用人工繁殖或收集的病原物，按一定量接种，创造发病条件，根据接种对象发病程度确定品种抗病性强弱.
对照品种controlcultivar
为了检验试验的可靠性，在品种鉴定时附加的抗病品种和感病品种.
4品种抗病性鉴定
4.1黑胫病
4.1.1田间病圃鉴定
4.1.1.1鉴定方法
选择排灌方便，肥力水平中等，连年发病较重的烟田作鉴定圃，病应明确病原生理小种类别.每个品种种植1行，每行20株以上，至少3次重复，随机排列，每重复设抗病品种“革新三号”、中抗品种“金星6007"和感病品种"小黄金1025”各1行为对照.另设当地种植的抗、中、感品种作为辅助对照.参鉴烟草品种在全生育期内不应使用杀菌剂，杀虫剂的使用根据病圆内害虫发生种类和程度而定.
人工接种鉴定，接种体选用当地优势生理小种或根据试验需要选取菌株.烟草移至大田成活后（10d~20d）用菌谷接种，每株接种量4g.接种后若天气干早应灌水，以使田间土壤含水量处于饱和状态.
菌谷制作方法：将谷子煮至约一半谷粒开花，捞出装人三角瓶，高压灭菌1h，将已培养好的黑腔病菌种，接种到灭菌后冷却的谷子上，然后置于28C~30C下培养15d~20d即成.
4.1.1.2分级及调查方法
病害严重度分级应符合GB/T23222的规定. 调查时间：于发病初期、盛期和末期各调查1次，每次均应调查各品种全部植株.
4.1.2室内接种鉴定
4.1.2.1鉴定方法
烟苗长至5片~6片真叶时，移栽至直径大于10cm的花盆，每盆2株.每品种10株~20株，对照80%的条件下诱发病害. 品种设置同4.1.1.1.待烟苗成活后，每株按0.25g~0.50g菌谷量接种，置于温度28C、相对湿度
4.1.2.2分级及调查方法
病害严重度分级应符合GB/T23222的规定.
调查时间：接种后第3d、5d、7d、10d调查病情.每次均应调查各品种全部植株.
4.2青枯病
4.2.1田间病圃鉴定
4.2.1.1鉴定方法
选择排灌方便，肥力水平中等，连年发病较重的烟田作鉴定圃，观察品种对青枯病的抗性.每品种种植1行，每行20株，至少3次重复，随机排列，设抗病品种“D101”、感病品种“长脖黄”为对照.各地增设当地抗、中、感品种为对照，参鉴烟草品种在全生育期内不使用杀菌剂，杀虫剂的使用根据病圆内 害虫发生种类和程度而定.
4.2.1.2分级及调查方法
病害严重度分级应符合GB/T23222的规定.调查时间：在田间发病初期、盛期和末期，进行田间调查，每次均应调查各品种全部植株.
4.2.2室内苗期接种鉴定
4.2.2.1鉴定方法
烟苗长至5片～6片真叶时，移栽至直径大于10cm的花盆，待烟苗成活后，用伤根灌菌液的方法，每个品种至少5株烟苗，3次重复以上.对照品种设置同4.2.1.1.每株灌20mL的青枯菌悬浮液（3×10°CFU/mL）.接种后置于温度28C~30C，相对湿度80%以上的环境中，观察发病情况.
接种体制备：接种体选用当地流行病原菌或根据试验需要选取菌株.将4C下保存于无菌水中的24h后移至肉汁斜面，继续培养24h后用无菌水稀释，至所需要的接菌浓度.
4.2.2.2分级及调查方法
病害严重度分级应符合GB/T23222的规定.
调查时间：接种后第7d、10d、15d、21d、30d进行调查，每次均应调查各品种全部植株.
4.3炭痘病
4.3.1菌种的培养
菌种的培养采用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基，26C下培养7d，用培养产生的分生孢子制备悬浮液供接种用.
4.3.2接种材料的准备
将烟苗移栽到直径大于10cm的花盆内，每品种至少3次重复，每重复至少5株烟苗.
4.3.3接种方法
于烟苗5片~6片真叶时进行炭疽菌孢子（1×10CFU/mL）接种，用小型手持喷雾器将孢子悬浮2
GB/T 23224-2008
液喷洒到植株上，以叶片正反面充分湿润为宜.接种后在保持温度26C～30C、相对湿度80%以上环境条件下生长.
4.3.4分级及调查方法
病害严重度分级应符合GB/T23222的规定. 调查时间：接种后第5d、10d、20d分别调查发病程度，每次均应调查各品种全部植株.
4.4根结线虫病
4.4.1温室接种鉴定
4.4.1.1接种体制备
接种体选用当地优势种及生理小种或根据试验需要选取，利用感病的番茄品种“Rutgers”接种繁殖根结线虫，在25C~30C下生长55d~60d后即可作为接种体使用.
4.4.1.2接种方法
采用线虫卵或病土接种法.烟苗长至3片～4片真叶时，移裁至直径大于10cm的花盆内，烟苗每盆接种5000个线虫卵；或将其载人装有病土（病根及根际病土与消毒营养土按1：4混合）的花盆中，接种后按常规管理并防止其他病虫干扰.在室温为25C～30C条件下生长.设感病品种“长脖黄”、抗病品种"T1706"和"NC95"为对照.设当地的抗病品种、中抗品种和感病品种为对照.每处理5株，随机排列，至少3次重复.
4.4.1.3分级及调查方法
病害严重度分级应符合GB/T23222的规定.
调查时间：接种后2个月，拔出烟株，用自来水冲去根部泥土，调查全部烟株根结线虫病病情.
4.4.2田间鉴定
4.4.2.1鉴定方法
选择根结线虫连年为害较重的田块，在自然发病条件下，鉴定品种对根结线虫的抗性，每品种至少种1行，每行20株，随机排列，至少设3次重复，对照品种与4.4.1.2相同.
4.4.2.2分级与调查方法
病害严重度分级应符合GB/T23222的规定.调查时间：收获期拔根调查病情，调查全部烟株根结线虫病病情.
4.5赤星病
4.5.1温室苗期接种鉴定
4.5.1.1接种体的制备
的孢子悬浮液作为接种液. 将烟草赤星病菌在PDA平板培养基上26C培养7d，用1%葡萄糖液配成浓度为1×10CFU/mL
4.5.1.2接种材料的准备
将烟苗移栽至直径大于10cm的花盆内，每品种20盆，每盆2株，至少设3次重复.
4.5.1.3接种方法
于烟苗9片~10片真叶时进行赤星病孢子（1×10CFU/mL）接种，用小型手持喷雾器将孢子悬浮液喷洒到植株上，然后置于人工气候箱内，设定温度26C~30C，相对湿度70%.设感病品种
4.5.1.4分级与调查方法
病害严重度分级应符合GB/T23222的规定.调查时间：接种后第7d、10d.20d调查发病程度.
