中华人民共和国国家标准
GB/T23381-2009
食品中6-苄基腺嘌呤的测定 高效液相色谱法
Determination of 6-benzylaminopurine in foods-High-performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出. 本标准由全国食品工业标准化技术委员会食品通用检测技术分技术委员会归口.本标准主要起草单位：上海市质量监督检验技术研究院、国家食品质量监督检验中心（上海）.本标准主要起草人：段文锋、林琳、熊薇、曹程明.
食品中6-苄基腺嘌呤的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了用高效液相色谱法测定食品中6-苄基腺呤（6-BA）含量的方法.
本标准适用于果蔬类（豆芽、黄瓜、番茄、香菇、草莓、橙类）等植物性食品及其制品中6-苄基腺嘌呤的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987，MOD)
3方法提要
试样经甲醇提取、浓缩并净化后，用高效液相色谱检测，外标法定量.
4试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1甲醇：色谱纯.4.2冰乙酸4.36-苄基腺嗪呤标准品：纯度≥99.0% 4.4C固相萃取柱：6mL，500mg，或相当者，使用前依次用5mL甲醇、10mL水活化4.5乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，用适量水溶解，加入1.0mL冰乙酸，加水定容至1 000 mL.4.66-苄基腺嗪呤标准储备液：准确称取6-苄基腺呤标准品0.0100g于100mL的容量瓶中，用甲4.76-卡基腺嘌呤标准工作液：取6-苄基腺嗪玲标准储备液1.0mL.用甲醇稀释并定容至100mL，此 醇溶解并定容至刻度.此溶液1.0mL相当于0.10mg6-苄基腺嘌呤.溶液1.0mL相当于0.0010mg6-苄基腺呤.4.8微孔滤膜：0.45m，有机相.
5仪器和设备
5.1组织捣碎机.5.4旋转蒸发仪. 5.5高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器.5.6固相萃取装置.5.7电子天平：感量0.1mg，
5.2离心机：转速不低于4000r/min，5.3超声波清洗仪，
6样品处理
6.1样品提取
提取15min，以转速不低于4000r/min离心10min，上清液转人50mL梨形瓶中，样品再次用20mL甲醇超声提取15min，离心合并上清液，用旋转蒸发仪（不超过60C）浓缩至近干，去除甲醇，残液待净化.
6.2样品净化
将6.1残液以2mL/min流速通过预先活化的固相萃取柱（4.4）.用少量水（约2mL）洗涤梨形瓶，洗液过固相萃取柱，再用5mL水洗涤固相萃取柱，去除杂质后用甲醇洗脱并定容至5.0mL，混匀后经0.45m滤膜过涉，作为待测液供HPLC分析.
7高效液相色谱测定
7.1HPLC参考条件
a）色谱柱：C250mm×4.6mm，5μm或相当型号色谱柱；b）柱温：30C；c）检测波长：267nm； d）流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液（4.5）=1:1；e）流速：1.0 mL/min:f）进样体积：10.0pl.
7.2测定
标准图谱参见图A.1. 分别取6-苄基腺嘌呤标准工作液和待测液10.0pL注人高效液相色谱仪进行测定，6-苄基腺票呤
7.3结果计算
样品中6-苄基腺嘌岭的含量（X）以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算：
式中：
X-样品中6-苄基腺骤呤的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A样品峰面积： c-"-6-苄基腺螺呤标准溶液浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V试样体积，单位为毫升（mL）；A-标样峰面积；m样品质量，单位为克（g）.计算结果保留两位有效数字.
8方法定量检出限
本方法的定量检出限为：0.02mg/kg.
9允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
图A.16-苄基腺嘌岭标样图谱（标样浓度1.0μg/mL）
