中华人民共和国国家标准
GB/T23533-2009
Immobilized glucose isomerase preparations
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由全国食品工业标准化技术委员会工业发酵分技术委员会归口. 本标准由中国轻工业联合会提出.本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院、诺维信（中国）生物技术有限公司.本标准主要起草人：张蔚、滕智津、郭新光、唐辰、翟文景.
固定化葡萄糖异构酶制剂
1范围
本标准规定了固定化葡萄糖异构酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存及保质期.
制剂产品的生产、检验和销售. 本标准适用于经淀粉质（或糖质）为原料，经微生物发酵、提纯、固定化制得的固定化葡萄糖异构酶
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T191包装储运图示标志（GB/T191-2008 ISO780：1997 MOD)
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准.
3. 1
葡萄糖异构离glucoseisomerase
能将D-葡萄糖转化为D-果糖的酶.
3.2固定化葡萄糖异构酶immobilizedglucose isomerase经载体固定化而成的葡萄糖异构酶.
葡萄糖异构酶活力activityofglucose isomerase
葡萄糖异构酶活力以葡萄糖异构酶活力单位表示，定义为1g固体化葡萄糖异构酶，在本标准规定的反应条件下，1h转化产生1mg果糖，即为1个酶活力单位，以u/g表示.
3. 4
生产能力productivity
在适宜的工作条件下，酶活力降至原活力的10%的过程中，1kg固定化酶能转化绝干葡萄糖为绝干果葡糖的量.
4要求
4.1外现不结块，无异味.
4.2固定化载体
所使用的固定化载体需符合相关标准要求.
4.3理化要求
应符合表1的规定.
表1固定化葡萄糖异构酶制剂的理化要求
目 要酶话力/（u/g） A 2 000生产能力/（1/kg） > 5强度 合格干燥失重/% 8 0可按供需双方合同规定的酶活力规格执行.
4.4卫生要求
应符合国家有关规定.
5试验方法
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水.
5.1外观
称取样品10g（或10mL），观察、噢闻作出判断，做好记录.
5.2酶活力
5.2.1.1溶液和试剂
5.2.1.1.1葡萄糖溶液（700g/L） 称取70g葡萄糖加人沸水中，使其完全溶解，冷却后用蒸馏水定容至100mL.
5.2.1.1.2磷酸缓冲溶液（pH=7.5）
分别称取磷酸二氢钠1.96g和十二水磷酸氢二钠39.62g，用水溶解并定容到500mL.如需要，调节溶液的pH到7.5±0.05.
5.2.1.1.3硫酸镁溶液（61g/L）
称取12.3g七水合硫酸镁（MgSO7HO），加水溶解并定容至100mL，
5.2.1.1.4高氯酸溶液（210mL/L）
量取市售的高氯酸试剂21mL，用水定容至500mL.
5.2.1.2分析步骤
称取适量固定化酶完整颗粒，用1mL磷酸缓冲溶液（5.2.1.1.2）于3C~7C浸泡16h后，加整至总体积5mL，于70C反应1h.加5mL高氯酸溶液（5.2.1.1.4）终止反应，测定果糖含量.
5.2.2适用于游动放线菌（Actinoplanes sp.）生产的葡萄糖异构酶制剂
5.2.2.1溶液和试剂
5.2.2.1.1葡萄糖溶渡（540g/L) 称取54.0g无水葡萄糖加人沸水中，使其完全溶解，冷却后用蒸馏水定容至100mL；
0=H）1
分别称取磷酸氢二钠12.36g和十二水合磷酸二氢钠41.0g，加水溶解并定容至1L.如需要，调节溶液的 pH到 7. 0±0.05.
5.2.2.1.3硫酸镁溶液（3.66g/L)
称取0.739g七水合硫酸镁（MgSO7HO)，加水溶解并定容至100mL.
5.2.2.1.4硫酸钴溶液（0.46g/L)
称取0.0843g七水合硫酸钴（CoSO7H:O），加水溶解并定容至100ml.
5.2.2.2分析步骤
称取适量固定化酵完整颗粒，用1mL磷酸缓冲溶液（5.2.2.1.2）于3C~7C浸泡16h后，加0.5mL磷酸缓冲溶液，0.5mL硫酸镁溶液（5.2.2.1.3），0.5mL硫酸钴溶液（5.2.2.1.4）和2.5mL终止反应，测定果糖含量. 葡萄糖溶液（5.2.2.1.1)，再加水调整至总体积5mL，于75C反应1h.加5mL高氯酸溶液（5.2.1.1.4）
5.2.3果糖的测定
5.2.3.1溶液和试剂
5.2.3.1.1半胱氨酸盐酸盐溶液（15g/L）
称取生化试剂半胱氨酸盐酸盐0.375g.用水溶解定容至25mL.
5.2.3.1.2咔唑酒精溶液（1.2g/L）
称取味唑30.0mg.用无水酒精溶解定容至25mL，放置在棕色瓶中.24h后使用.
5.2.3.1.3硫酸溶液
取市售浓硫酸450ml，在不断搅拌下徐徐倒人190mL水中.
5.2.3.1.4标准果糖溶液
称取55C真空干燥至恒重的果糖125.0mg.精确至0.0001g，用水定容至25mL（即5mg/mL），存放于冰箱备用.使用时稀释100倍（即50μg/mL）.
5.2.3.2分析步骤
5.2.3.2.1绘制标准曲线
取25mL比色管分别加人50 μg/mL果糖标准溶液0mL、0. 2mL0.4mL、0.6mL和0.8mL 分别用蒸馏水补充至1mL后，于每管中加人0.2mL半胱氨酸盐酸盐溶液（5.2.3.1.1）、6mL硫酸溶液（5.2.3.1.3），摇匀后，立即加人0.2mL咔唑酒精溶液（5.2.3.1.2），摇匀，于60C水浴中保湿10min，取出，用水冷却，用10mm比色Ⅲ于560nm波长下比色，以吸光度对果糖作图，即得标准曲线.
5.2.3.2.2样品测定
准确吸取1.0mL于25mL比色管，加入0.2mL半胱氨酸盐酸盐溶液、6mL硫酸溶液，摇匀后，立即加人0.2mL味唑酒精溶液，摇匀，于60C水浴中保温10min，取出，用水冷却，用10mm比色m于560nm波长下比色，记录吸光度后，在标准曲线图上查得相应的果糖含量.
5.2.4计算
5.2.4.1离反应液产生果糖含量的计算
酶反应液产生果糖的含量按式（1）计算：
.( 1 )
式中：
；-吸光度在标准曲线上查得的果糖质量，单位为微克（pg）； X酶反应液产生果糖的质量，单位为克（g）：稀释倍数；1000-质量换算系数.结果保留至整数位.
5.2.4.2样品酶活力的计算
样品的酶活力按式（2）计算：
***( 2 )
