中华人民共和国国家标准
GB/T23818-2009
Determination of imidazolinone herbicide residues in soybean
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B均为资料性附录.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国江西出入境检验检疫局.本标准主要起草人：李晓娟、祁彦、张新忠、占春瑞、陈冬东、代汉慧、彭涛、贾然、李建忠、杨强、李淑娟、储晓刚.
大豆中咪唑啉酮类除草剂残留量的测定
1范围
本标准规定了大豆籽粒中咪唑烟酸、甲基咪草烟、味草酸甲酯、咪唑乙烟酸、咪唑喹啉酸残留量的高效液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法.
本标准适用于大豆籽粒中咪唑烟酸、甲基咪草烟、咪草酸甲酯、咪唑乙烟酸、咪唑喹啉酸残留量的测定.
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
3原理
试样用二氯甲烷提取，凝胶渗透色谱法和液液分配法净化，高效液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量.
4试剂和材料
除非另有说明，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1乙睛：色谱纯.4.2正已烷：色谱纯.4.4磷酸. 4.3二氯甲烷.4.5滤膜：0.22ym，有机相.4.6标准物质4.6.1咪唑烟酸（imazapyr，CAS No.81334-34-1)：纯度大于等于99%.4.6.2甲基咪草烟（imazapic，CASNo.104098-48-8)：纯度大于等于99%. 4.6.3咪草酸甲酯（imazamethabenz-methyl CAS No.81405-85-8）：纯度大于等于 99.5%.4.6.4唑乙烟酸（imazethapyr，CASNo.81335-77-5）：纯度大于等于99%.4.6.5咪唑唑咻酸（imazaquin，CASNo.81335-37-7）：纯度大于等于99.5%.4.7标准储备溶液：分别准确称取各标准物质10mg（精确至0.1mg），用乙晴溶解并定容至100ml，配制成浓度为100ug/mL的标准储备溶液，各标准储备溶液于0C～4C避光保存.
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器.5.2液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾电离源.5.4样品筛：筛孔尺寸0.425mm. 5.3粉碎机.5.5分析天平：感量为0.1mg和1mg
5.6涡旋混合器.5.7振荡器.5.9离心机. 5.8旋转蒸发仪.5.10具塞离心管.5.11凝胶渗透色谱仪：填料BiobeadsS-X3，40g；玻璃柱700mm×25mm：流动相二氯甲烷；流动相流速5.0mL/min；进样量5.0mL;检测波长250nm
6试样制备与保存
6.1试样制备
取代表性试样500g，用粉碎机粉碎并使其全部通过0.425mm的样品筛，混和均匀，装入洁净的容器内，密封并标识.
6.2试样保存
试样于0C～4C避光保存.取样、制样及保存过程中应防止试样受到污染或者残留农药含量发生变化.
7分析步骤
7.1提取
准确称取5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，向离心管中加人35mL二氯甲烷-涡旋混合2min后置于振荡器上振荡提取20min，以4000r/min速度离心5min，取上层清液并经二氯甲烷润湿的滤纸过滤后，收集于100mL梨形瓶中.再向残余试样中加人35mL二氯甲烷，重复上述操作.再用10mL二氯甲烷分3次～5次洗涤离心管和滤纸，合并洗涤液于梨形瓶中，于40C水浴中减 压浓缩至约3mL.将浓缩液用二氯甲烷定容至10mL，以4000r/min速度离心5min，再将上层清液转移至GPC进样瓶中，待净化.
7.2净化
的馏分共45ml，于40C水浴中减压浓缩至近干，再用氮气吹干.用2mL乙晴溶解残渣，再加人2mL乙饱和的正已烷，误旋振荡2min，静置分层后弃去正已烷层，乙晴层用氮气吹干.再用乙晴定容至1. 0 mL 供 HPLC和 LC-MS/MS 测定.
7.3高效液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定
7.3.1高效液相色谱法参考条件
a）色谱柱：C柱，250mm×4.6mm（内径），5m，或相当者；b）柱温：30C；c）流动相及梯度洗脱程序参见附录A；d）流速：1.0mL/min;f）检测波长：250nm e）进样量：10pL;
7.3.2液相色谱-质谱/质谱法参考条件
a）色谱柱：C柱，150mm×2.1mm（内径），3.5pm，或相当者；b）柱温：30C；c）流动相及梯度洗脱程序参见附录A； d）流速：0.2mL/min;e）进样量：10pL;
f）质谱/质谱参考条件参见附录A.
7.3.3定量测定
7.3.3.1HPLC法：根据样液中味唑啉酮类除草剂的含量，选取浓度相近的标准工作溶液，待测样液 中咪唑啉酮类除草剂的响应值应在仪器检测的线性范围内.对标准工作溶液及样液等体积交替进样测定.在7.3.1的仪器条件下，保留时间约为味唑烟酸8.60min，甲基咪草烟11.50min，咪草酸甲酯13.73min，咪唑乙烟酸15.98min，咪唑喹咻酸20.38min.色谱图参见附录B中图B.1.
7.3.3.2LC-MS/MS法：根据样液中咪唑啉酮类除草剂的含量，选取浓度相近的标准工作溶液，待测样液中咪唑啉酮类除草剂的响应值应在仪器检测的线性范围内.对标准工作溶液及样液等体积交替进 样测定.在7.3.2的仪器条件下，保留时间约为咪唑烟酸5.21min，甲基咪草烟6.63min，咪草酸甲酯7.03min，咪唑乙烟酸7.29min，味唑唑晰酸7.78min.多反应监测质量色谱图参见附录B中图B.2.
7.3.4定性测定
按照上述条件测定试样和标准溶液，如果试样中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶液相比在土2.5%的允许偏差之内：样品中待测组分的两个子离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比，相对 丰度偏差不超过表1的规定，则可判断试样中存在相应的目标化合物.
表1定性离子相对丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% S >20~50 >10~20 ≤10允许的最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
7.4空白试验
除不称取试样外，均按上述条件和步骤进行.
8结果计算与表达
试样中待测化合物的残留量可采用数据处理软件或按式（1）计算：
式中：
X.一试样中待测化合物的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）：C.一从标准曲线中得到的待测化合物的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；m一最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）. V-样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
9测定低限和回收率
9.1测定低限
本标准液相色谱法对各待测物的测定低限为0.05mg/kg；液相色谱-质谱/质谱法对各待测物的测定低限为0.02mg/kg.
9.2回收率
本标准高效液相色谱法在添加浓度0.05mg/kg~1.00mg/kg范围内，回收率在88.2%~105.9%之间；
本标准液相色谱-质谱/质谱法在添加浓度0.02mg/kg~1.00mg/kg范围内，回收率在81.8%~103.9%之间.
