中华人民共和国国家标准
GB/T24800.8-2009
Determination of methotrexate in cosmetics byhigh performance liquid chromatographymethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A为资料性附录.本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口 本标准由中国轻工业联合会提出.本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所.本标准主要起草人：王星、武婷、张庆、肖海清、席广成、马强、沈敏、康薇.
引言
添加到化妆品中.如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带人化妆品时，则化妆品成品应符合《化妆品 本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害.目前我国尚未规定该物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定该物质提供检测方法.
化妆品中甲氨嘌呤的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了化妆品中甲氨呤的测定方法.本标准适用于化妆品中甲氨呤的测定.本标准对于甲氨嘌岭的检出限为1mg/kg，定量限为2.5mg/kg.
2原理
以流动相-甲醇与0.025mol/L磷酸二氢钠（pH5.0）（3070，v/v）为溶剂，超声提取、离心，
3试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯.水为超纯水.
3.1甲醇：色谱纯.3.2四氢呋响：色谱纯.3.4甲氨嘌呤标准储备液：准确称取甲氨嘌呤0.05g.精确到0.0001g，于50mL烧杯中，加1mL 3.3甲氨嘌呤，纯度不小于97%，CAS编号为：59-05-2.0.1mol/L氢氧化钠溶液溶解后移人100mL容量瓶中.用超纯水定容至刻度，即得甲氨嗪呤溶液浓度为500mg/L的标准储备液.储备液在冰箱冷藏保存，可使用两个月.3.5标准工作溶液：用水将上述标准储备液（3.4）分别配成一系列浓度0.05mg/L、0.1mg/L、3.60.1mol/L的氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.4g，精确到0.001g，于50mL烧杯中，加水溶解后 1 mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L20mg/L的标准工作溶液，冰箱冷藏保存，可使用一周.转移至100mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得0.1mol/L的氢氧化钠溶液.3.70.025mol/L的磷酸二氢钠（pH5.0)：称取磷酸二氢钠（NaHPO2HO）3.9g.精确到0.001g，于100mL烧杯中，加水溶解转移至1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得0.025mol/L的磷酸二氢钠溶液，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液（3.6）调节pH至5.0.
4仪器
4.1液相色谱仪，配有二极管阵列检测器.4.2微量进样器，10g.4.3超声波清洗器， 4.4离心机，大于5000r/min4.5溶剂过滤器和0.45pm有机过滤膜.4.6具塞比色管，10ml.
5测定步骤
5.1样品处理
称取化妆品试样约0.2g，精确到0.001g，于10mL具塞比色管中.加人8mL流动相（甲醇：
相稀释至刻度，混匀.取部分溶液放人离心管中，在离心机上于5000r/min离心20min，离心后的上清液经0.45μm有机滤膜过滤，滤液待测定用.
对于口红等含蜡质较多的化妆品样品，提取溶剂为四氢呋响-磷酸二氢钠（0.025mol/L，pH5.0）(11 v/v)，其他步骤同上.
5.2测定
5.2.1色谱条件
5.2.1.1色谱柱：C柱（250mm×4.6mm内径，5pm），或相当者； 5.2.1.2流动相：甲醇：0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH5.0），3070（v/v）；5.2.1.3流速：1.0mL/min;5.2.1.4柱温：25C;5.2.1.5检测波长：302nm； 5.2.1.6进样量：10l.
5.2.2标准工作曲线绘制
分别移取10μL 浓度为-系列0.05mg/L、0.1mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、10mg/L20mg/L的标准工作溶液，按色谱条件（5.2.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线.
标准物质色谱图参见附录A的图A.1.
5.2.3试样测定
用微量注射器准确吸取10gL试样溶液（5.1）注入液相色谱仪，按色谱条件（5.2.1）进行测定，记录液中的被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围之内.被测物含量高的试样可取适量试样溶液用流 色谱峰的保留时间和峰面积，由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的甲氨嘌呤的浓度.试样溶动相稀释后进行测定.
5.2.4定性确认
品相一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱相一 液相色谱仪对样品进行定性测定，进行样品测定时，如果检出甲氨螺呤的色谱峰的保留时间与标准致，则可初步确认样品中存在甲氨岭.必要时，阳性样品需用其他方法进行确认试验.
5.3平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定.
5.4空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行.
6结果计算
结果按式（1）计算（计算结果应扣除空白值）：
（1)
式中：
X一样品中甲氨原呤的质量浓度，单位为毫克每千克（mg/kg）；（标准曲线查得甲氨嘌呤的浓度，单位为毫克每升（mg/L）：V一样品稀释后的总体积，单位为毫升（mL）；-样品质量，单位为克（g）.
7方法检出限与定量限
甲氨嘌呤的检出限为1mg/kg，定量限为2.5mg/kg.
