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目次
前言 1范围 2规范性引用文件 3术语和定义 4灵芝酸A含量检测 4.1方法概述 4.2仪器设备 4.3试剂材料 4.4测试方法 4.5结果计算 5精密度 5.1重复性3 5.2再现性 附录A（资料性）灵芝酸A标准品色谱图
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前言 定起草本文件按照GB/T1.1-2020（标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则）的规 本文件由中国食用菌协会提出并归口。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。
本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
科技有限公司、广东粤微食用菌技术有限公司、中国医学科学院西物研究所本文件起草单位：江西仙客来生物科技有限公司、浙江寿仙谷医药股份有限公司、安发（福建）生物 康洁、徐泽群，成俊、郑重。
本文件主要起草人：潘峰、李振皓、高益、谢意珍、梅愉、李明焱、郑春源、高、焦春伟、陈若芸、
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灵芝子实体中灵芝酸A含量检测方法
1范围 本文件描述了灵芝子实体中灵芝酸A含量检测方法。
本文件适用于灵芝子实体、子实体提取物及其相关制品。
2规范性引用文件 下列文件中的内容是过文中响规范性引用面构成本文件必不川少的条其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的数本适期于本文件：不注日期的引用文件，其最新版车（包括听有的修改单）适用于 本文件。
GB/T 668分新实验室用水规格和试验方法 GB/T128-2006食用菌末语 3术语和定义 GB/12728-2006界的参销和定义本 4灵芝融A含量检测 4.1方法概述 试样经电醇超市提取，损政液经藏压能缩后，前甲游激解，商效流相自谐法源定，以保留时间进行 定性，外标法定量 4.2仪器设备 4.2.1高效液相色诺仪配紫外检测器。
4.2.2超声波请洗器，功半大于450W都率50Hz~100H 4.2.33分析天平，感量0.01g和001g 4.2.4样品粉碎机。
4.2.55旋转蒸发仪。
4.3试剂材料 4.3.1除非另有规定，试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682中规定的三级水要求，色谱 用水应符合GB/T6682中规定的一级水要求。
4.3.2甲醇：色谱纯。
4.3.3甲酸：色语纯。
4.3.4乙睛：色谱纯。
4.3.5灵芝酸A（CAS号81907-62-2)：纯度≥96%。
4.3.6有机系滤膜：0.45μm。
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4.4测试方法 4.4.1供试品溶液制备 取灵芝产品，粉碎，过二号筛。
取粉末0.5g.精密称定，于50mL离心管中，加人甲醇25mL，置于 超声波清洗器中超声提取30min.提取液冷却后过滤，取滤液5mL置于10mL到度试管中，于50℃ 左右氮气吹干，残留物用1.0ml.甲醇溶解.0.45um越腰过滤，取续滤液，作为供试品溶液 4.4.2对照品溶液制备 称取灵芝酸A标准品10mg.精密称定，置于10mL容量瓶中.加甲醇溶解并稀释至刻度摇匀，即 得对照品储备液。
4.4.3色谱参考条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（150mm×4.6mm.5ym）：以乙晴：0.1%甲酸溶液（30：70）为 流动相.检测波长为 258nm，柱温为40C：流速为1.0 mL/min：进样量为20pL。
理论板数按灵芝酸A峰计算应不低于10000。
重复性：对照品图谱中，灵芝酸A的峰面积棚对标准编差（RSD）应不大于2.0%。
分离度：供试品图谱中，灵芝酸A与相邻峰的分离度应大于1.5。
4.4.4标准曲线制备 准确吸取适量标准品储备液用甲醇稀释，配制质量浓度为1.00yg/mL、2.00pg/mL.5.00μg/ml 10.0pg/mL.20.0pg/ml.和50.0yg/mL.的标准工作液，按参考色谱条件测定，以灵芝酸A的质量浓度 为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或计算线性回归方程 4.4.5测定 取供试品溶液20L，注人液相色谱仪，按4.4.3色遣参考条件与系统适用性试验下的色谱备件进 行含量测定，以外标法计算样品中灵芝酸A含量，按照保留时间进行定性，灵芝酸A标准品色谱图参 见附录A。
样品与对照品的保留时间的相对偏差不大于2%，供试品溶液中灵芝酸A响应值应在标准 曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析，同时做空白试验： 4.5结果计算 试样中灵芝酸A的量以质量分数w计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算。
AXaxV X([)......... A,×m 式中： A-试样中灵芝酸A的峰面积； P-标准工作液中灵芝酸A的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； V试样液最终定容体积、单位为毫升（mL）； A-标准工作液中灵芝酸A的峰面积； 试样的质量，单位为克（g）； 一样品稀释倍数 以两次平行测定值的算数平均值作为测定结果，保留小数点后两位数字。
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5精密度 5.1重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的相对平均偏差不应超过5%。
5.2再现性 在再现性条件下获得的两次独立测试结果的相对平均偏差不应超过10%。
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