中华人民共和国国家标准
GB/T28643-2012
饲料中二英及二英类多氯联苯的测定 同位素稀释-高分辨气相色谱/高分辨 质谱法
Determination of PCDD/Fs and dioxin-like PCBs in feedsIsotopedilutionHRGC/HRMS
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.
本标准主要参考了美国环境规划署（US EPA）颁布的1613B（Tetra-through octa-chlorinated diox-ins and furans by isotope dilution HRGC/ HRMS 1997) 和 1668A(Chlorinated biphenyl congeners inwater，soil，sediment，and tissue by HRGC/HRMS，1999）方法，以及《欧盟关于饲料的分类及其中二英和二曙英类多氯联苯的限量标准3（Directive 2002/32/EC.last amended in3February 2006）文件.油脂类样品中二曙英和二嗯英类多氯联苯的测定参考GB/T5009.205一2007《食品中二嗯英及其类似 物毒性当量的测定》.
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口.
本标准起草单位：中国科学院生态环境研究中心、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心（北京）、国家环境分析测试中心、中国科学院大连化学物理研究所.
本标准主要起草人：张庆华、杨曙明、刘爱民、倪余文、王璞、李兰、贾静、李英明.
饲料中二英及二英类多氯联苯的测定 同位素稀释-高分辨气相色谱/高分辨 质谱法
1范围
多氯代二苯并二嗯英（PCDDs）和多氯代二苯并呋喃（PCDFs）（以下简称PCDD/Fs）以及12种二英类 本标准规定了用同位素稀释-高分辨气相色谱/高分辨质谱法测定饲料中17种2.3.7.8-氯取代的多氯联苯（DL-PCBs）（见表A.1和表A.2）的方法.
本标准适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料以及伺料添加剂.
本标准方法分析饲料中PCDD/Fs和DL-PCBs的检测限见表B.1.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T5009.2052007食品中二嗯英及其类似物毒性当量的测定 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T14699.1何料采样GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
应用加速溶剂提取和索氏提取等技术提取样品中的PCDD/Fs和DL-PCBs，提取液经过复合硅胶柱、碱性氧化铝柱等填装色谱柱净化、浓缩后，用高分辨气相色谱/高分辨质谱进行分析检测，同位素稀释法定量：根据各目标化合物的毒性当量因子（TEF）与所测得含量相乘后累加计算样品中PCDD/Fs 和DL-PCBs的毒性当量（TEQ）.
4试剂和材料
用水. 除非另有规定，在分析中均使用农残级（pesticideresidue）试剂和符合GB/T6682规定的一级
4.1正已烷.4.2二氯甲烷.4.3甲苯. 4.4壬烷.4.5浓硫酸（优级纯）.4.6氢氧化钠（优级纯）.
4.7标准溶液.4.7.1PCDD/Fs同位素标记定量内标标准溶液：PCDD/Fs的同位素标记定量内标溶液浓度见表4.7.2PCDD/Fs同位素标记的回收率内标标准溶液：PCDD/Fs的同位素标记回收率内标溶液 C.1，分析测试中可直接使用，无需稀释.（C-1.2，3.4-TCDD和C-1，2.3，7.8，9-HxCDD）浓度见表C.2，分析测试中可直接使用.4.7.3PCDD/Fs精密度和回收率检查标准溶液（PAR）：用壬烷配制的含天然PCDD/Fs溶液（见表C.3），用于检测过程中精密度和回收率试验（OPR）. 4.7.4PCDD/Fs校正标准溶液：为含有天然和同位素标记的PCDD/Fs系列校正溶液（见表C.4）.测定校正标准溶液，可以获得天然与同位素标记PCDD/Fs的相对响应因子（RRF）.CS3可用于已建立RRF的日常校正和校正曲线校验：CS1可用于检查HRGC/HRMS应具备的灵敏度.4.7.5DL-PCBs同位素标记定量内标标准溶液：DL-PCBs的同位素标记定量内标溶液浓度见表C.5. 分析测试中应稀释后使用.4.7.6DL-PCBs同位素标记的回收率内标标准溶液：DL-PCBs的同位素标记回收率内标溶液浓度见表C.6.分析测试中应稀释后使用.4.7.7DL-PCBs精密度和回收率检查标准溶液（PAR）：用壬烷配制的含天然DL-PCBs溶液（见 表C.7），用于检测过程中精密度和回收率试验（OPR）.4.7.8DL-PCBs校正标准溶液：为含有天然和同位素标记的DL-PCBs系列校正溶液（见表C8）.其中CS3可用于已建立RRF的日常校正和校正曲线校验，CS1可用于检查HRGC/HRMS应具备的灵敏度.4.8硅胶. 4.8.1活性硅胶：使用前在550℃下活化12h，于干燥器中密封保存，1个月内使用.4.8.2酸性硅胶（质量分数为40%）：称取60g活性硅胶（4.8.1）于烧瓶中，用滴管逐滴加人40g浓硫酸（4.5）并不断摇动使其较均匀混合，再将烧瓶加塞后固定于摇床上进行振荡，直至硅胶呈均匀流动状4.8.3酸性硅胶（质量分数为30%）：称取70g活性硅胶（4.8.1）于烧瓶中，用滴管逐滴加人30g浓硫 态，密封保存于干燥器中，1个月内使用.酸（4.5）并不断摇动使其较均匀混合，再将烧瓶加塞后固定于摇床上进行振荡，直至硅胶呈均匀流动状态，密封保存于干燥器中，1个月内使用.30mL水，混匀后用滴管逐滴加人到硅胶中，再将烧瓶加塞后振荡至硅胶呈均匀流动状态，密封保存于 4.8.4碱性硅胶：称取100g活性硅胶（4.8.1）于烧瓶中，称取1.2g氢氧化钠（4.6）于烧杯中，并加人干燥器中，1个月内使用.4.9碱性氧化铝：使用前在600℃下活化24h.于干燥器中密封保存，1个月内使用，4.11活性炭（质量分数为18%）： 4.10弗罗里土：60目~100目，使用前在140℃下烘烤至少7h，取出后1h内使用.活性炭：CarbopackC，Supelco 10258，或其他等同类型.分散剂：Celite545coarse，Fluka22140”，或其他等同类型.称取9.0g Carbopack C和41.0gCelite 545coarse充分混和，在130C下活化至少6h，于干燥器中密封保存：1个月内使用. 4.12无水硫酸钠：在660℃下灼烧至少6h，于干燥器中密封保存，1个月内使用.
5仪器与设备
实验室常用仅器设备及以下设备：
5.1高分辨气相色谱/高分辨质谱仪（HRGC/HRMS）.
1）给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可.如果其他等效产品具有相同的效果、则可使用这些等效产品.
5.2旋转蒸发器.5.3氮气浓缩器.5.4超声波清洗器. 5.5振荡器（摇床）.5.6加速溶剂提取仪，压力：10.3 MPa(1 500 psi）~13.7 MPa(2 000 psi)），温度；100C ~200℃C.5.8烘箱：能够在105℃~250C范围内保持恒温（士5℃）.5.10玻璃层析柱：带聚四氟乙烯柱塞，底部装有砂芯，150mm×8mm（内径），300mm×15mm 5.9马弗炉：能够在200℃~700℃C范围内保持恒温（土10℃）.（内径）.5.11自动凝胶渗透色谱（GPC）：净化柱（内径15mm~20mm），内装70gS-X3凝胶（200目~400目).
5.7天平：感量0.01g:0.1mg
6采样和试样制备
按GB/T14699.1进行样品采集：按GB/T 20195制备试样，过0.28mm孔筛.
7分析步骤
7.1提取
7.1.1饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和饲料添加剂（提供铜源的饲料添加剂及其预混合饲料除外）的提取
样品的提取采用加速溶剂提取法.称取样品10.0g（准确至0.01g），与10g无水硫酸钠（4.12）混定量内标（4.7.1和4.7.5)，进行提取.
提取条件：
a）提取溶剂：正己烷（4.1）1二氧甲烷（4.2）=11（体积比），100mL;b)压力 ;10 3 MPa(1 500 psi) :c）温度：120C；e）循环3次； d）加热时间：7min:静态提取时间：8min；吹扫时间：2min；f）样品收集于250mL接收瓶中.也可采用其他等效的提取方法.
7.1.2提供铜源的饲料添加剂及其预混合饲料的提取
样品提取采用索氏提取法.称取样品20.0g（准确至0.01g），与10g无水硫酸钠（4.12）混合均匀，转移至垫有1cm活性硅胶（4.8.1）的索氏提取筒中，分别加入PCDD/Fs和DL-PCBs的C标记定量内标（4.7.1和4.7.5）.置于索氏提取器中进行提取.
提取条件：
a）提取溶剂：正已烷（4.1）二氯甲烷（4.2）=1：1（体积比） 250mL； b）提取时间：18h~24h；c）回流速度：3次/h~4次/h
