中华人民共和国国家标准
GB/T28940-2012
病媒生物感染病原体采样规程 鼠类
Sampling procedure of vector infected by pathogens-Rodent
中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口
本标准主要起草单位：北京出人境检验检疫局、中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所、中国疾病预防控制中心传染病预防控治所.
本标准主要起草人：郭天宇、刘艳华、任形、董言德、鲁亮、夏连续.
病媒生物感染病原体采样规程鼠类
1范围
本标准规定了鼠及鼠血样和脏器取样方法、样本的保存方法以及整个过程的安全防护.本标准适用于感染或可能感染病原体的鼠类现场采样和保存.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB19489实验室生物安全通用要求WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则
3试剂及材料
3.1消毒剂
2%碘酶、75%酒精.
3.2抗凝剂
乙二胺四乙酸（EDTA）、草酸盐合剂、肝素、枸橡酸钠、氟化钠、草酸钾.制备及用量参见附录A.
3.3组织、脏器保存液
20%中性甘油盐水、50%甘油磷酸盐缓冲液、组织保存液、RNAlater保存液.制备及用量参见附“日
乙醚、氯仿.
3.5其他
液氮、干冰.
4实验用品
4.1实验用仪器设备
生物安全柜、一80C低温冰箱、高压灭菌器、液氮罐、离心机、移液器、带盖搪瓷盘、3号～5号一次性针头注射器、直头眼科镊、眼科剪刀、大号镊子、吸管、平Ⅲ、冻存管、针线、鼠袋、鼠固定板、鼠固定盒、赞尸炉.
4.2个人防护用具
白（浅）色防护服（连体服）、白色长简袜、长筒雨靴、无粉手套、口罩、眼罩、杀虫气雾剂.
5鼠样本采集
5.1采集要求
捕获鼠单体装鼠袋.登记捕获方法、时间、地点、状态（活体、死亡、是否腐败等）、鼠样本基本信息（重量、性别、体长、尾长、右后足长、耳高等）.采血和脏器组织样本前，用麻醉剂麻醉鼠和鼠体寄生虫， 梳检寄生虫后，再进行血液和脏器组织的采集.
5.2鼠样本采集方法
5.2.1鼠笼法
将鼠笼放置在鼠润口或鼠道等有鼠活动的地方采集鼠类，诱饵为生花生米、油条、瓜子、红薯块等.
5.2.2鼠夹法
将鼠夹放置在鼠润口或鼠道等有鼠活动的地方采集鼠类，诱饵为生花生米.
5.2.3粘鼠板法
将粘鼠板放置在鼠洞口或鼠道等有鼠活动且雨水淋不到的地方采集鼠类，无需诱饵.
5.2.4毒饵毒杀法
选择有鼠活动的场所采用毒饵灭鼠，采集毒毙鼠.
5.2.5熏蒸法
选择有鼠活动的密闭场所采用熏燕灭鼠药灭鼠，采集毒毙鼠.
5.2.6其他方法
选择有鼠活动的场所采用翻草堆或掘滥等人工捕提方法采集鼠类.
5.3鼠血样采集方法
5.3.1左前肢腋窝下采血
将鼠仰卧固定于鼠固定板上，消毒后将左胸皮肤剪开，并将皮肤与肌肉剥离，向左前肢展开面成一袋状，以消毒剪刀将左前肢腋下静脉剪开，用吸管或注射器吸取流出的血液.
5.3.2尾静脉采血
将鼠装人固定盒内，盖上盒盖，露出鼠尾，用手揉擦或用温水（45℃～50℃）加温鼠尾，也可用二甲苯等化学药物涂擦鼠尾，使鼠尾静脉充分充血后，用剪刀剪去尾尖，尾静脉血即可流出.用手轻轻从尾根部向尾尖部挤几下，可以采到数滴血.
5.3.3心脏采血
将鼠仰卧固定于鼠固定板上，剪去心区部位的被毛，用碘百、酒精消毒皮肤.在左侧底3助～4助
间，用左手食指摸到心搏，右手取连有3号～5号针头的注射器，选择心搏最强处穿剩.当针头正确刺到心脏时鼠血由于心搏自然进人注射器，即可进行取血.
5.3.4眼眶动脉和静脉采血
用左手抓住鼠，拇指和食指尽量将鼠头皮肤捏紧使鼠眼球突出.右手取直头眼科镊，在鼠右侧眼球根部将眼球摘去，并将鼠倒置，头朝下，此时眼眶内很快流血，将血滴人预先加有抗凝剂的平Ⅲ内，直到无血液流出为止.
5.3.5后眼眶静脉丛连续穿刺采血
取血时，手从背部捉住鼠，拇指和食指握住颈部，利用对颈部所加的压力，使头部静脉激血，在突出的眼球旁分辨出后眼眶静脉.将消毒的吸管用抗凝剂湿润其内墅，从内侧眼角将吸管转向前，并轻压刺人Tenon民筋膜然后由鼻侧眼眶壁平行地对喉头方向推进，深约4.5mm就达到后眼眶静脉丛，血液自然进入吸管内，
5.3.6断头采血
实验者右手握住鼠头部，左手握住背部，露出颈部，助手用剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉.立即将鼠颈向下，对准已准备好的平Ⅲ（内放凝血剂），鼠血即可从颈部很快滴人容器内.
5.3.7颈静脉采血
将鼠仰卧固定于鼠固定板上，将一侧颈部外侧的被毛剪去，用消毒液消毒皮肤，作一般外颈静脉分离手术，颈静脉暴露清楚后，用注射器针头沿静脉平行方向刺人，抽取所需血量.
5.3.8股静脉或股动脉采血
大鼠可进行股静脉或股动脉采血.将鼠麻醉后，剪开腹股沟处皮肤，即可看到般静脉，把此静脉剪断或用注射器采血即可，股动脉较深需剥离出，再采血.
5.4鼠脏器及脑组织采集步骤
5.4.1所用解副用具应煮沸或高压消毒灭菌，将应用器械以剖解顺序分次排列在灭菌有盖的瓷盘内.整个过程在生物安全柜中进行.5.4.2鼠户固定于解剖盘上，腹部向上，用消毒液消毒腹部皮肤.5.4.3以镊子提起耻骨缝前面的皮肤，用剪刀剪开.并沿正中线直剪到下额部.然后用钝头剪刀或刀 柄剥离皮肤，再把皮肤向四肢剪开，翻转皮肤.剪开腹壁前先用碘酐或酒精消毒.5.4.4用无菌剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开再行横切开，并切取肝、脾、肾等脏器放入冻存管中，保存在低温冰箱或加保存液保存.5.4.5另换灭菌剪刀，切开隔肌，剪断胸骨两侧软助骨（呈倒V型），翻起胸骨，再切取心脏和肺脏放人冻存管，保存在低温冰箱中或加保存液保存. 5.4.6取脑组织时，固定头部，用碘消毒，剪开头皮露出头骨，再以碘配消毒，更换一套无菌剪、银，沿脑部边缘剪开头骨用剪使脑与骨剥离，取出整个鼠脑放入冻存管，保存在低湿冰箱中或加保存液保存.5.4.7剖解完毕，高压后按实验室垃圾处理，或将鼠户投入户炉焚化，或在75%酒精中消毒后深埋.
用75%酒精处理生物安全柜台面紫外消毒30min.所用的器械都要高压消毒.
