中华人民共和国国家标准
GB/T28977-2012
Detection and identification ofAphelenchoidesritzemabosi(Schwartz）Steiner &Buhrer
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口本标准起草单位：宁波检验检疫科学技术研究院、广东出人境检验检疫局检验检疫技术中心.本标准主要起草人：顾建锋、王江岭、张慧丽、赵立荣、陈先锋、闻伟刚.
菊花滑刃线虫检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了菊花滑刃线虫的检疫鉴定方法.本标准适用于植物和繁殖材料、介质、土壤中菊花滑刃线虫的检疫和鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T24829毛刺线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法
3菊花滑刃线虫基本信息
学名Aphelenchoides ritzemabosi(Schwartz 1911)Steiner &. Buhrer，1932.
英文名chrysanthemum foliar nematode chrysanthemum leaf nematode bud and leaf nematodeof chrysanthemum foliar nematode of chrysanthemum 或 chrysanthemum celworm.
中文名又称菊花叶线虫、菊花芽线虫、菊花叶芽线虫、腋芽滑刃线虫、菊花叶枯线虫或里泽马博斯滑刃线虫.
属滑刃目Aphelenchida.滑刃科Aphelenchoididae，滑刃属Aphelenchoides.
菊花滑刃线虫是植物专性寄生线虫主要外寄生或内寄生于多种寄主植物的芽、叶或花，也可存活于种子及土壤中，主要通过植物繁殖材料和鲜切花等进行远距离传播.
相关种类有草莓滑刃线虫A.fragariae（Ritzema Bos）Christie、水稻干尖线虫A besseyi Christie和毁芽滑刃线虫A.blastophzharus Franklin 等.
菊花滑刃线虫的其他信息参见附录A.
4方法原理
根据菊花滑刃线虫的危害状，在检疫现场肉眼观察，选取变色、畸形的花、叶、芽以及根际介质或土壤，用直接浸泡法或漏斗法等进行线虫分离，用显微镜观察，根据形态特征对种类进行判定.雌虫尾尖突和雄虫交合刺形态是重要的种类鉴定依据.
5器材与试剂
见GB/T 24829
6症状检查
现场检疫时要注意观察植株花、叶、芽等是否有枯死、福色角斑、矮小、畸形等受害症状（参见附录
A），以及是否带介质、土壤等.重点选取表现上述症状的花、叶、芽等植物组织及根际介质或土壤，如无可疑症状则按要求随机取样.取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检测.
7实验室检验
7.1线虫分离
实验室接到样品后应立即进行线虫分离.若不能及时分离，可将样品保存在4℃～10C冷藏箱中.种子、花、叶、芽、蒸等可用直接浸泡法或漏斗法分离线虫，介质或土壤适宜用漏斗法或浅盘分离法等分离线虫（参见GB/T24829）.
7.2体视显微镜镜检
菊花滑刃线虫体长约1000μm-放大10倍以上可见.虫体细长，在水中不停作"S"形扭动，行动活跃.
7.3标本制作
若镜检发现线虫，需制作临时玻片或永久玻片（参见GB/T24829）.
7.4生物显微镜观察、摄影和测量
囊、尾形、口针、侧线、排泄孔和神经环位置、雄虫交合刺等.应在每张图片上加相应标尺，测量并计算 应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，主要鉴定特征包括雌虫尾尖突形态、后阴子宫a、b、b”、c、c'、V等值.如样品足够应测量雌、雄虫各15条以上.
8形态学鉴定
8.1滑刃属线虫形态鉴定特征
雌虫：体长0.5mm~1.2mm，热杀死后虫体直或略腹弯：头部高圆，常有明显缩，头架骨化弱；口针细弱，长约10ym~12gm，不超过20ym；中食道球发达，瓣门显著；雌虫阴门位于虫体中后部，般位于体长的60%～75%：单生殖腺、前伸，偶尔有回折；卵母细胞单行或多行排列；后阴子宫囊通常存在，并含有精子：尾圆锥形，有或无尾尖突，尾尖突形态多变.
达，有时缺；尾乳突通常3对，无交合伞. 雄虫：热杀死后尾端强烈腹弯，整个虫体呈"J"形：交合刺玫瑰刺状、成对、不愈合；基顶和喙通常发
8.2菊花滑刃线虫测计值
测计值见表1.
表1菊花滑刃线虫测计值
特征菊花滑 后阴子宫刃线虫 mm L 体宽 pm 冀长 V或7xm维虫 0. 77 ~1. 20|16. 5 ~19. 5 115 ~147 40. 0 ~60. 5 8. 1~13. 0| 4. 5 ~6. 1 16. 0~23. 1 3. 7 ~5. 1 66. 0~75 0
表1（续）
特征菊花滑 体宽 后阴子宫刃线虫 mm μm 冀长 μm V或70. 63~0 9316 0~19 2 31 0 ~53. 310 0 ~14. 0 4. 3~5 0 16 0~30. 0 2 8 ~3 1 35 0~ 64 0维虫注1：L一体长；α一体长/最大体宽；b一体长/虫体前端至食道与肠连接处的距离；b”一体长/虫体前端至食道腺末 箱的距离=c-体长/尾长：c-尾长/肛门处体宽：Sr-口针长：V-虫体前箱至阴门的距高×100/体长=7泄殖腔口至精巢末端的距离×100/体长.注2：表内数据综合参考Allen，1952:Vavlas等，2005;Chizhov等，2006;Crozzoli等，2008.
8.3菊花滑刃线虫形态鉴定特征
雌虫：虫体细长，0.7mm~1.2mm：体环明显（宽为0.9μm~1.0μm），侧区为体宽的六分之一至五分之一，侧线4条：头部近半球形，缩明显，头架骨化弱：口针细弱，针锥部急剧变尖，基部球小面明显：食道前体部较细，中食道球发达、卵形，瓣门显著，背、腹食道腺开口于中食道球：食道腺长叶状，背覆 盖肠，长约4倍体宽：食道与肠交接处位于中食道球后约8pm处，神经环位于中食道球后约1.5倍体宽处，排泄孔位于神经环后约0.5~2倍体宽处；单卵巢前伸，卵母细胞多行排列；阴门横裂，阴门唇梢突起；后阴子宫囊发达，长度超过肛阴距的1/2，通常含有精子；尾长圆锥形，末端有2～4个尾尖突，使尾端侧面观呈刷状.
雄虫：较常见，虫体尾部向腹面弯曲超过180°；单精巢前神，交合刺玫瑰剩形，平滑弯曲，基顶和喙不显著，背边长20.0m~26.5pm：尾乳突3对，第1对位于泄殖腔附近，第2对位于尾中部，第3对位于近尾端；尾端有2~4个尾尖突，形态多变（参见附录B、附录C、附录D）.
8.4与近似种的区别
菊花滑刃线虫雌虫与属内其他近似种（主要是尾尖突呈星形的种类）的比较参见附录E.
除菊花滑刃线虫外，滑刃属线虫中植物寄生线虫主要还有草莓滑刃线虫A.fragariae、水稻干尖线虫 A.besseyi和毁芽滑刃线虫A，blastophthorus.
菊花滑刃线虫和水稻干尖线虫的区别是前者排泄孔位于神经环后0.5～2倍体宽处，后阴子宫囊长度超过肛阴距的二分之一，而后者排泄孔位于神经环对应处，后阴子宫囊小于肛阴距的三分之一.
菊花滑刃线虫与草莓滑刃线虫、毁芽滑刃线虫的主要区别是雌虫尾尖突：草莓滑刃线虫雌虫末端钝尖，无尾尖突；毁芽滑刃线虫只有1个尾尖突.
9结果判断
以雌虫和雄虫的形态学特征为主要鉴定依据.葡花滑刃线虫的主要鉴定特征是：侧线4条；雌虫后阴子宫囊长超过肛阴距的二分之一，常充满精子：尾长圆锥形，尾尖突复杂，为2～4个向后伸的尾尖突，形成剧状结构.雄虫交合刺平滑腹弯，无基顶和喙，符合上述特征，可鉴定为菊花滑刃线虫，寄主与地理分布等信息可供参考.
