中华人民共和国国家标准
GB/T29763-2013
Chemicals-Rare Minnow (Gobiocyprisrarus）acute toxicity test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251）提出并归口.
本标准起草单位：土海市检测中心、环境保护部化学品登记中心、中国科学院水生生物研究所、中国检验检疫科学研究院、环境保护部南京环境科学研究所、沈阳化工研究院有限公司安全评价中心.
本标准主要起草人：殷浩文、张京估、赵华清、沈英娃、刘纯新、聂晶磊、王剑伟、陈会明、李瞻、石利利、刘济宁、王蕾、蔡磊明、赵玉艳.
化学品稀有鲫急性毒性试验
1范围
本标准规定了稀有鲫化学品急性毒性试验的方法，包括静态试验、半静态试验和流水式试验三种方式，受试物所需信息、原理、设备与材料、试验系统、试验程序、质量控制和结果报告.
本标准适用于测试稀有鲫的化学品急性毒性.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T27861化学品鱼类急性毒性试验
3术语和定义
GB/T27861界定的术语和定义适用于本文件.
受试物所需信息包括：
a）水中溶解度：b）蒸气压；c）结构式； d）纯度：e）在水中和光照条件下的稳定性；pKa值：g）水溶液中的定量分析方法；h）正辛醇-水的分配系数（P）； i）快速生物降解试验结果，
5原理
5.1用于测定受试物短期暴露对稀有鲫可能产生的影响，以评价受试物的短期毒性.5.2将稀有瓣暴露于含不同浓度受试物的水溶液，以96h为试验周期，在24h、48h、72h和96h时记录受试鱼的死亡率，确定50%稀有瓣死亡时的受试物浓度，用LC表示.
6设备与材料
6.1仪器设备仪器设备包括：
GB/T 29763-2013
a）溶解氧测定仪（1%）；b）水硬度计（1mg/L）；(Hd ） H(p c）温度控制系统（0.1℃）：e）分析天平（0.0001g）；f）情性材料制成的水族箱或水槽”，规格一致，体积适宜：g）适用于流水式的连续分配和稀释系统（如，计量泵、稀释仪等）.
6.2材料与试剂
标准稀释水用到的试剂包括：
a）氯化钙：b）硫酸镁；c）碳酸氢钠： d）氯化钾.试剂应是分析纯，用电导率小于或等于10uS/cm的蒸馏水或去离子水配制.
7试验系统
7.1试验方式的选择
装置”7.1.2试验期间，受试物在水溶液中的浓度维持在初始实测浓度的土20%内，可采用静态试验方式.当水溶液中受试物不稳定时，即浓度变化超过士20%时应采用半静态试验方式或流水式试验系统以维持受试物的浓度.
7.1.1在试验之前，应根据受试物在水中的化学稳定性确定合适的试验方式，从而选定需用的容器和
7.2稀有約鲫
7.2.1选择
试验鱼种为稀有鲍鲫（Gobiocyprisraras），全长范围为 30 mm土10 mm.应在养鱼场和实验室条件（pH为6.0~8.5；温度为21℃~25C：光照为每天12h~16h：溶解氧浓度不低于空气饱和值的80%）下驯化和饲养.应保证一次试验用鱼为同一批号，规格一致、来源可靠、健康且无明显的畸形.
7.2.2暂养和驯养
7.2.2.2临试验前，应在符合下列条件的环境中至少列养7d.
a）水：与试验用水水质相同； b）光照：每天12h~16h；c）温度：21℃~25℃；d）溶解氧浓度：不低于空气饱和值的80%；e）喂养：每周3次或每天投食，至试验开始前24h为止.
2）根据试验方式和负荷量进行选择.
1）根据样品理化特性，选择材料合适的试验容器.如，玻璃等.
GB/T 29763-2013
7.2.2.3驯养开始48h后，记录死亡率，并按下列条件处理：
a）7d内死亡率小于5%，可用于试验.b）7d内死亡率在5%～10%之间，继续驯养7d，如果死亡不再发生，该批试验鱼可用于试验. c）7d内死亡率大于10%，舍弃整组鱼.
7.3试验用水
250 mg/L(以 CaCO 计) pH 为 6 0~8. 5. 应用标准稀释水（参见附录A）、曝气除氯的自来水或高质量的天然水，水的总硬度为10mg/L~
7.4受试物的制备
7.4.2难溶物质的贮备液可以通过超声分散或其他适合的物理方法配制，必要时可以使用对鱼毒性低 溶液.的有机溶剂、乳化剂和分散剂.使用这些物质时应加设溶剂对照试验组，且试验容器中的溶剂浓度应相同，并不应超过100mg/L或100pL/L.7.4.3应在加人前调节受试物贮备液的pH，使其接近试验用水的pH.调节贮备液的pH时不应使受 试物浓度明显改变，不应发生化学反应或沉淀，宜使用HCI和NaOH来调节.
7.4.1将受试物溶解于试验用水中配制成受试物贮备液，通过稀释贮备液配制成一定浓度的试验
7.4.4如果加人受试物后水的pH有明显变化（超出6.0~8.5），则重新配制试验溶液.
8试验程序
8.1暴露条件
a）持续时间：96 h.b）承载量：静态和半静态试验系统每升水中鱼的总湿重不超过1.0g，流水式试验系统承载量可适当提高.c）光照：每天12h~16h. d）温度：21℃C~25℃且试验期间温度变化不超过2Ce）溶解氧浓度：不应低于空气饱和值的60%.曝气时不应使受试物浓度明显变化.f）喂食：禁食.g）干扰：避免可能影响鱼行为的干扰.
8.2预试验
8.2.1用以确定正式试验所需浓度范围，可选择较大范围的浓度系列，如1000mg/1.、100mg/L、10 mg/L、1mg/L、0.1mg/L.每个浓度组放人的稀有鲍瓣不少于3尾，不设平行组.试验时间为96h. 每日记录各容器内的死鱼数，并及时取出死鱼.
8.2.2如果一次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度范围，应调整浓度范围再次进行预试验.
8.3正式试验
8.3.1根据预试验，在包括使稀有鲫全部死亡的最低浓度和96h稀有鲫全部存活的最高浓度之间至少应设置5个浓度组，并以儿何级数”排布.浓度间隔系数应小于或等于2.2.同时设一个空白对照组.如使用了溶剂，应增设溶剂对照组，且试验容器中的溶剂浓度应相同.每一浓度组和对照组应至少使用7尾稀有鲍鲫.
