中华人民共和国国家标准
GB/T30089-2013
化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲 的测定液相色谱/串联质谱法
Determination of chlorporpamide carbutamide and tolbutamide incosmetics by LC-MS/MS method
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草.
本标准由全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会（SAC/TC374）归口.
本标准起草单位：国家化妆品质量监督检验中心（北京）、北京市海淀区产品质量监督检验所、中检联盟（北京）质检技术研究院.
本标准主要起草人：郭启雷、杨红梅、史海良、赵丽、刘艳琴、田艳玲.
化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲 的测定液相色谱/串联质谱法
1范围
本标准规定了化妆品中氯磺丙豚、氨磺丁豚、甲苯磺丁脲的液相色谐/串联质谱测定方法.本标准适用于水剂类、膏霜类、凝胶类、粉类及唇膏类化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
水剂类、膏霜类、凝胶类、粉类化妆品用甲醇提取：唇膏类化妆品经四氢呋哺分散，甲醇提取，固相萃取小柱净化，采用高效液相色谱/串联质谱仅测定，外标法定量.
4试剂与材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.2甲醇：色谱纯. 4.1乙睛：色谱纯.4.3甲酸：色谱纯.4.4四氢味哺.4.6氯化钠. 4.5氨水.4.70.1%甲酸水溶液：准确移取1mL甲酸（4.3）至1000mL容量瓶中，用水定容.4.82%甲酸甲醇溶液：准确移取10mL甲酸（4.3）至500mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容.4.95%氨水甲醇溶液：准确移取25mL氨水（4.5）至500mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容.4.10标准样品：氯磺丙脲、氨磺丁豚、甲苯磺丁脲标准样品，具体信息见表1.
表1标准样品信息
中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量氯碳丙豚 Chlorpropamide 94-20-2 C H CINO;S 276.74氨碳丁豚 Carbutamide 339-43-5 CHNOS 271.34甲苯磺T服 apmnq 64-77-7 C: H N;O; S 270 35
4.11标准溶液.4.11.1标准储备溶液：准确称取0.1g氯磺丙豚、氨磺丁豚、甲苯磺丁脲标准样品（4.10）（精确至0.0001g），分别用甲醇（4.2）配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，4C冰箱保存，有效期6个月. 4.11.2混合标准储备溶液：分别准确量取1.00mL氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁豚标准储备溶液（4.11.1）至100mL容量瓶中，用甲醇（4.2）稀释定容，配制成0.01mg/mL的混合标准储备溶液，4℃C冰箱保存，有效期1个月.4.11.3混合标准工作溶液：准确量取1.00mL混合标准储备溶液（4.11.2）至100mL容量瓶中，用甲醇（4.2）稀释定容配制成100ng/mL的混合标准工作溶液，4℃冰箱保存，临用前配制. 4.12PAX固相萃取小柱：CleanertPAX阴离子交换柱或性能相当者，60mg/3 mL，预先用3mL甲醇（4.2）、3mL5%氨水甲醇溶液（4.9）活化.4.13微孔滤膜：0.22pm，有机相.
5仪器和设备
5.1高效液相色谱/申联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源.5.2分析天平：感量分别为0.0001g和0.00001g. 5.3高速离心机：离心力不低于6000g.5.4超声波清洗器.5.5涡旋混合器.5.6氮吹仪.
6分析步骤
6.1样品制备
6.1.1水剂类样品
称取样品1.0g（精确至0.001g），加人甲醇（4.2）定容至5.0mL，涡旋30s，必要时6000g离心10min，经0.22pm微孔滤膜（4.13）过滤，滤液用液相色谱/申联质谱仪测定.
6.1.2膏霜类、凝胶类、粉类样品
称取样品0.5g（精确至0.001g），加人甲醇（4.2）定容至5.0mL，加人氯化钠（4.6）2g.刷烈振荡使样品分散，涡旋1min，超声15min，6000g离心10min，取上清液经0.22μm微孔滤膜（4.13）过滤，滤液用液相色谱/申联质谱仪测定.
6.1.3唇膏类样品
称取样品0.4g（精确至0.001g），加人2mL四氢呋喃（4.4），剧烈振荡使样品分散，涡旋1min，超声10min，加人5%氨水甲醇溶液（4.9）定容至10.0mL，加入氯化钠（4 6）2g，超声10min，6000g离 心10min，取5ml上清液流经已预先活化的PAX固相萃取小柱（4.12），待上清液自然流尽后，用3mL甲醇（4.2）淋洗，用吸球吹出小柱中残留液体，弃去.再加人3mL2%甲酸甲醇溶液（4.8）洗脱，待甲酸甲醇溶液自然流尽后，用吸球吹出小柱中残留液体，收集洗脱液，缓慢氮气流下吹干，准确吸取1mL甲醇（4.2）溶解，经0.22pm微孔滤膜（4.13）过滤滤液用液相色谱/串联质谱仪测定.
6.2标准工作曲线的制备
取相应的空白样品，按照步骤6.1进行处理，用得到的空白样品提取液稀释混合标准工作溶液
（4.11.3），配制所需浓度系列的标准溶液，按浓度从低到高依次经液相色谱/申联质谱仪测定，以定量离子的峰面积为纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标，得标准工作曲线.
氯磺丙豚、氨磺丁腺、甲苯磺丁豚的LC-MS/MS多反应监测质量色诺图参见图A.1.
6.3测定
6.3.1液相色谱参考条件
色谱柱：C色谱柱，150mm×2.1mm（id.），3.5μm，或性能相当者；流动相：流动相及梯度洗脱程序见表2：d）柱温：40C； c) 流速：0.3mL/min;e）进样量：5pL.
表2液相色谱梯度洗脱程序
时间 min A相乙晴/% B相：0.1%甲酸水溶液/%0 20 805 40 6012 40 6012.1 20 80
6.3.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源（ESI）：b）扫描方式：正离子扫描：c) d) 干燥气：氮气，温度350C，流速10L/min； 监测方式：多反应监测（MRM）；e) 雾化器：氮气，压力40psi；f) 毛细管电压：4000V.g）保留时间、定性离子对、定量离子对、碎裂电压及碰擦能量见表3.
表3氯磺丙腺、氨磺丁脲、甲苯磺丁腺的质谱参数
保留时间 碎裂电压 碰撞能量化合物 min 定性离子对（mr/x） 定量离子对（m/z） V eV氨碳丁际 272.2/92.1 306 8 272 2/74 2 272.2/74 2 80 10氨碳丙际 10.0 277.1/175 0 277 1/111 0 80 15277 1/111 0 35甲苯磺丁服 11.1 271 1/155.0 271 1/91 1 90 15271 1/91 1 35
