中华人民共和国国家标准
GB/T30737-2014
Determination of marine photosynthetic picoplanktonFlow cytometry
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
目 次
前言1范围2规范性引用文件 术语和定义方法原理主要仪器设备6试剂7样品采集与处理8测定步骤9结果分析与计算参考文献 10
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由国家海洋局提出.
本标准由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口.
本标准起草单位：国家海洋局南海环境监测中心、厦门大学、国家海洋局第二海洋研究所、华东师范大学、中国科学院南海海洋研究所.
方宏达、许战洲、蔡伟叙、曲念东. 本标准主要起草人：朱艾嘉、焦念志、黄楚光、骆庭伟、邓鸿、乐风风、邱大俊、李海涛、杨振雄、林端、
海洋微微型光合浮游生物的测定 流式细胞测定法
1范围
本标准规定了海洋微微型光合浮游生物中原绿球藻、聚球藻和微微型真核藻类细胞数量的流式细胞测定法.
本标准适用于海洋微微型光合浮游生物中上述3个主要类群细胞数量的流式细胞测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T12763.6一2007海洋调查规范第6部分：海洋生物调查
3术语和定义
GB/T12763.62007界定的以及下列术语和定义适用于本文件.
3.1
浮游生物plankton
缺乏发达的运动器官，没有或仅有微弱的运动能力，悬浮在水层中，常随水流移动的生物.注：改写GB/T 12763.6-2007定义3 9
3.2
微微型浮游生物picoplankton
粒径范围在0.2pm~2pm的浮游生物.注1：微微型浮游生物不是一个严格的生物学概念，面是一个生态学概念.注2：改写GB/T 12763.6-2007、定义3.9
微微型光合浮游生物photosyntheticpicoplankton
能进行光合作用的微微型浮游生物.
注：微微型光合浮游生物又包括自养和异养两种类型以自养型的占绝对优势.自养型的微微型光合浮游生物由三个主要类群组成：原绿球藻、聚球藻和微微型真核藻类.异养型的微微型光合浮游生物主要为不产氧光合细(anoxygenic phototrophic bacteria APB)
3.4
原绿球藻Prochlorococcus Spp.：Pro.
蓝细菌（Cyanobacteria）中的一属，为原核生物，粒径一般为0.6μm左右，其主要特征色素为二乙烯基叶绿素（DiVinyl-Chlorophyll DVChl).
3.5
聚球藻Syaechococcus spp.:Syn.
蓝细菌中的一属，为原核生物，粒径一般为1μm左右，除了含有叶绿素a（Chlorophylla）外，其主
GB/T 30737-2014
要特征色素为藻胆蛋白（phycobiliprotein，PBP），包括藻红蛋白（phycoerythrin，PE）和藻蓝蛋白（phycocyanin PC).
9'
微微型真核藻类picoeukaryotes；Euk.
由多种隶属于不同门类的真核浮游植物组成，粒径范围在0.2μm～2μm，它们的主要色素为叶绿素a.
4方法原理
本方法是一种在单细胞水平上对微微型光合浮游生物细胞物理化学和生物化学性质进行快速测定的方法.含有荧光物质的微微型光合浮游生物细胞在检测区受激光照射后，产生前向散射光、侧向散射光和荧光.前向散射光信号表征细胞的大小和形状，侧向散射光信号表征细胞质的颗粒性，荧光信号表征细胞的荧光物质含量.根据原绿球藻、聚球藻和微微型真核藻类上述信号的不同进行区分和计数.
5主要仪器设备
主要仪器设备如下：
a）流式细胞仪（配备488nm激光器）： b）液氮罐；c）超低温冰箱（一80C）；d）涡振荡器.
6试剂
6.1固定剂
样品可采用多聚甲醛溶液（固定终浓度为1%）或戊二醛溶液（固定终浓度为0.1%）进行固定，也可同时加人多聚甲醛溶液和戊二醛溶液进行固定（固定终浓度分别为1%和0.05%）.多聚甲醛溶液和戊二醛溶液获得方法如下：
a）多聚甲醛溶液：市售电子显微镜用多聚甲醛溶液或自制10%多聚甲醛溶液.自制10%多聚甲醛溶液配置方法是：在通风翻中称取10g多聚甲醛粉末放人70mL煮沸的蒸馏水中，连续揽 拌至少2h（可使用恒温磁力搅拌器）：加入少量氢氧化钠（NaOH）溶液（0.1mol/1）直至溶液澄清；加人10mL10%的磷酸盐缓冲液（PBS），调节到pH7.5：定容至100mL:用孔径为0.2m的注射器过滤器过滤.过滤后的多聚甲醛溶液可分装于15mL的小管中，一20℃保存.未冻结的多聚甲醛溶液（4℃保存）使用不宜超过1周.b）戊二醛溶液：市售电子显微镜用25%或50%戊二醛溶液，
注：上述因定终旅度均为体积百分比.
6.2鞘液
葡液宜使用经孔径0.2um滤膜过滤的现场海水，也可使用超纯水.
6.3标准荧光小球（beads）悬浮工作液
用超纯水稀释直径1pm的标准黄绿荧光小球悬浮液至浓度约为10个/pL的工作液.
