中华人民共和国国家标准
GB/T32118-2015
Determinateion of formaldehyde in toothpaste-High performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由中国轻工业联合会提出. 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口.本标准起草单位：土海美加净日化有限公司.本标准主要起草人：陈健芬、施裔磊.
牙膏中甲醛含量的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了牙膏中甲醛含量测定的高效液相色谱法.
本标准适用于牙膏中添加有甲醛的含量测定，不适用于含有其他甲醛释放剂的牙膏产品.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
3原理
将牙膏用水溶解，离心和分离后，上清液以2，4-二硝基苯为衍生化试剂，在加热的条件下反应生成甲醛衍生物2，4-二硝基苯踪，用带紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定，对照标准工作曲线计算样品中甲醛的含量.
甲醛与2，4-二硝基苯耕反应生成2，4二硝基苯棕的反应式如图1所示.
图1甲醛衍生化反应式
4试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水，
4.1乙睛：色谱纯.4.2甲醛标准溶液（10.0mg/mL）：安培瓶时装置于10℃以上保存，使用时与室温平衡，摇动均匀，打开后推荐一次性使用，或者将标准溶液转移至棕色瓶密封，于10℃以上保存.4.3冰乙酸：分析纯. 4.4乙酸钠：分析纯4.52，4-二硝基苯肼：纯度≥99%4.6乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH=5.0）：称取2.64g乙酸钠，以适量水溶解，加人1.0mL冰乙酸，用水定
容至500ml.
4.72，4-二硝基苯肼溶液（0.6g/1）：称取2.4-二硝基苯肼300mg.用乙晴溶解并定容至500mL.得甲醛浓度为0.05mg/ml的标准储备液.4.9甲醛标准工作溶液：分别移取0.5 mL 1 mL，2 mL 3 mL 4 mL，5mL的甲醛标准储备液（4.8）于一组10mL的容量瓶中，用水定容至刻度，配制浓度为 2.5pg/ml.5 pg/mL，10pg/mL，15 μg/mL 20 pg/ml，25μg/mL的标准工作液.
4.10微孔滤膜：0.45gm，有机相.
5仪器与设备
5.2分析天平：感量0.0001g. 5.1高效液相色谱仪（HPLC）：配有二极管阵列检测器或紫外检测器.5.3磁力搅拌器.5.4离心机.5.5恒温水浴锅.
6分析步骤
6.1样品制备
精密称取牙膏样品约5g（精确至0.0001g），用水定容至100mL容量瓶中，搅拌至均匀离心分离（4000r/min110min，准确移取2mL上清液于10mL比色管中，加人3mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH=5.0）后，用0.6g/L的2，4-二确基苯肼溶液定容，盖上塞后混匀.将比色管移人60℃水浴锅中进 行衍生，反应时间为1h.反应完成后，冷却至室温，经0.45μm有机系微孔滤膜过滤后，供HPLC进样测定.
6.2甲醛衍生物标准溶液的制备
钠缓冲溶液（pH=5.0）后，用0.6g/L的2，4-二硝基苯肼溶液定容，盖上塞后混匀.将比色管移人60℃水浴钢中进行衍生反应，时间为1h.反应完成后，冷却至室温，经0.45pm有机系微孔滤膜过滤后，供HPLC进样测定.
注：标准溶液、空白溶液与样品溶液需同时进行衍生.
6.3测定
6.3.1色谱分离条件
a）液相色谱柱：DionexAcclaimTM120型C色谱柱（3yum，3×150mm），或相当的色谱柱；b）流动相：乙晴：水=60：40（体积比）；c）流速：1.0 mL/min;d）柱温：30℃；）检测波长：360nm； e）检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器：g）进样量；20pl.
6.3.2标准工作曲线的绘制
物的峰面积为纵坐标，以系列标准溶液中甲醛的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线. 将甲醛系列标准工作液的衍生液（6.2）按浓度从低到高依次导人液相色谱仪进行测定，以甲醛衍生
甲醛标准样品的二极管阵列检测器液相色谱图参见附录A中的图A.1.
6.3.3定量分析
定.以样品溶液中甲醛衍生物的峰面积与标准曲线比较定量.待测物的响应值均应在线性范围内. 本方法采用标准工作曲线法测定甲醛的含量.样品溶液和试剂空白溶液导入液相色谱仪进行测
6.4空白实验
除不称取样品外，均按上述样品处理步骤和测定条件进行.
6.5平行实验
按以上步骤，对同一样品进行平行试验测定.
7结果计算
样品中甲醛的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算，计算结果需扣除空白值.测定结果用平行测定结果的算术平均值表示.
式中：
X--样品中甲醛的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；样品中甲醛衍生物面积对应的浓度，单位为微克每毫升（pμg/mL）；V-样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； k-稀释倍数：m样品的质量单位为克（g）.
8检出限
本方法牙膏中甲醛的检出限为20mg/kg.
9回收率
本方法的回收率在95%~110%，相对标准偏差小于5%.
