中华人民共和国国家标准
GB/T32947-2016
蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇的测定 气相色谱法
Determination of octacosanol and triacontanol contents in beeswaxGas chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由中华全国供销合作总社提出. 本标准由全国蜂产品标准化工作组归口.本标准起草单位：中国农业科学院蜜蜂研究所、农业部蜂产品质量监督检验测试中心（北京）、中国养蜂学会.
本标准主要起草人：李烟、薛晓锋、黄京平、吴杰、吴黎明、赵静、张金振、周金慧、陈芳、王鹏、陈兰珍.
蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇的测定 气相色谱法
1范围
本标准规定了蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇含量的测定方法.本标准适用于蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇含量的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件、
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样经回流水解后，用三氯甲烷提取样品中的二十八烷醇、三十烷醇，提取液经无水硫酸钠干燥净化，气相色谱火焰离子化检测器检测，外标法定量.
4试剂与材料
4.1除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水.4.2氢氧化钾.4.3无水硫酸钠.使用前650C灼烧4h. 4.4三氯甲烷.4.595%乙醇.4.60.5mol/L的氢氧化钾乙醇溶液；称取2.8g氢氧化钾，用100mL95%乙醇溶解于塑料瓶中，常温4.7二十八烷醇、三十烷醇标准品：纯度≥98%. 密封保存.4.8二十八烷醇、三十烷醇标准储备液：分别称取20mg二十八烷醇、三十烷醇标准品，精确至0.1mg，放人100mL.容量瓶中，加三氯甲烷超声波溶解后定容，常温密封保存.4.9二十八烷醇、三十烷醇标准工作溶液：准确吸取标准储备液0.50mL.1.00mL、2.50mL、5.00ml、10.00mL于10mL容量瓶，用三氯甲烷配制成10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L、
200.0mg/L的标准工作溶液.常温密封保存.
5仪器设备
5.1气相色谱仪：配有火焰离子化检测器（FID）.5.2超低温冰箱.5.3高速粉碎研磨仪.
GB/T 32947-2016
5.4分析天平：感量0.1mg和0.001g，5.5旋转蒸发仪.5.6回流装置. 5.7超声波清洗器.5.8滤膜：有机系，0.45m.
6试样制备与保存
6.1试样的制备
取样品200g置于超低湿冰箱中（-18C），1h后取出，用粉碎机研磨成粉状，置于样品瓶中，密封标记，
6.2试样的保存
将试样置于密封袋中，-18C冷冻保存.
7测定步骤
7.1提取
称取均匀的试样0.25g.精确至0.001g.置于150mL锥形瓶中，加入20mL氢氧化钾溶液，水浴玻璃离心管中，加人30mL水，涡振荡1min，静置，除去上层液体，再重复用30mL水清洗两次后，将有机相转移至100mL容量瓶中，并用三氯甲烷定容.测定前，取10mL溶液用10g无水硫酸钠干燥，用0.45μm微孔滤膜过滤，待气相色谱测定.
7.2气相色谱条件
气相色谱条件参考以下参数：
a）色谱柱：（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷30m×0.25mm（内径）×0.25pm或相当者；b）柱温：200C保持1min，以5C/min的速率升湿到320℃C，保持10min；c）进样口温度：320℃： d）检测器温度：340℃；e）载气：氮气（N），纯度≥99.99%；f）燃气：氢气（H），纯度≥99.99%：h）氢气流速：30mL/min; g）柱流速：1.0mL/min;i）空气流速：300mL/min；j）不分流进样：2g.
7.3气相色谱测定
依据，以其色谱峰面积值定量测定样品中二十八烷醇、三十烷醇的含量.标准工作液及试样液中的响应 取适量试样溶液和相应的标准工作溶液注人气相色谱仅分析，以其标准溶液峰的保留时间为定性值均应在仪器检测的线性范围之内，标准溶液和试样溶液的气相色谱图参见附录A.
8结果计算
试样中二十八烷醇、三十烷醇的含量按式（1)计算：
式中：
文一试样中二十八烷醇、三十烷醇的质量百分比含量，%：C -从标准曲线中得到的被测组分的浓度，单位为毫克每升（mg/L）：V-试样溶液定容体积，单位为升（L）：m一试样的质量，单位为克（g）.
测定结果取其两次测定的算术平均值，计算结果保留三位有效数字.
9检测限、回收率范围和精密度
本标准中二十八烷醇的定量检测限为0.20%，三十烷醇的定量检测限为0.32%.
蜂蜡样品中添加浓度及回收率的范围的试验数据（a=6）如下：
a）二十八烷醇在1%~5%三个水平，添加的回收率范围为89.0%~102%，相对标准偏差（RSD）为1.64%~5.04%;b）三十烷醇在2%~10%三个水平，添加的回收率范围为86.5%~110.2%，相对标准偏差（RSD）为1.81%~3.66 %.
