中华人民共和国国家标准
GB 31614.5-2026
食品安全国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准
食品中二氢皮素的测定
1范围
本标准规定了食品中二氢榭皮素含量的液相色谱测定方法.本标准第一篇适用于食品中二氢皮素含量的测定.本标准第二篇适用于二氢皮素原料中二氢皮素含量的测定.
第一篇食品中二氢皮素的测定液相色谱法
2原理
试样经2%乙酸溶液、甲醇提取，固相萃取柱净化后，经C反相液相色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯.3.1.3正已烷（CH）. 3.1.2乙酸（CHCOOH）：色谱纯
3.2试剂配制
3.2.12%乙酸溶液：量取20.0ml乙酸用水定容至1000mL.混匀.3.2.350%甲醇溶液（含1%乙酸）：量取500mL甲醇，加人500mL2%乙酸溶液，混匀. 3.2.210%甲醇溶液：量取10.0mL甲醇用水定容至100mL，混匀.3.2.40.1%乙酸溶液：吸取1mL乙酸用水稀释至1000mL，混匀，3.2.550%甲醇溶液（含0.05%乙酸）：量取500ml甲醇，加人500mL0.1%乙酸溶液，混匀.
3.3标准品
二氢皮素（C；HO，CAS号：480-18-2）：纯度≥99%的标准品或其溶液.
3.4标准溶液配制
3.4.1二氢棚皮素标准储备液（1000mg/1)：准确称取二氢皮素标准品0.1g（精确至0.0001g）于烧杯中，用50%甲醇溶液（含1%乙酸）溶解，全部转移至100m1容量瓶中，用50%甲醇溶液（含1%乙
酸）定容至刻度混匀，一18C下密封保存有效期6个月.中，用50%甲醇溶液（含0.05%乙酸）定容至刻度，混匀.于0C~4C下密封保存，有效期1个月.3.4.3二氢柳皮素标准系列工作液：分别准确吸取0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL标准中间溶液，用50%甲醇溶液（含0.05%乙酸）配制成质量浓度分别为1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L和100mg/L的标准工作液.临用现配.
3.5材料
3.5.1固相萃取柱：200mg/6ml.N-乙烯基毗咯烷酮和二乙烯基苯亲水亲脂平衡型填料，或性能相当3.5.2微孔滤膜：聚四氟乙烯（PTFE).0.45cm. 者.使用前依次用5mL甲醇、5mL水活化.
4仪器和设备
4.2天平：感量为0.01 g和0.0001g. 4.1液相色谱仪：配紫外检测器.4.3涡旋混合器.4.4离心机：转速≥8000r/min.4.6超声波清洗器. 4.5氮吹仪.4.7固相萃取装置.4.8水浴振荡器.4.9高速粉碎机.4.10匀浆机.
5分析步骤
5.1试样制备
液体样品摇匀，含气样品经超声处理，去除其中的气体：固体样品需粉碎：半固体样品取固液共存物匀浆混合：糖果、巧克力及其制品等黏性较大的样品先经一18C冷冻后用高速粉碎机粉碎均匀.取其中200g装入容器中，液体试样于4C冷藏保存，其他试样于一18C保存.固体饮料：按产品标签标示的冲调比例，用水冲调至规定体积，充分溶解混匀后，按液体样品处理.
5.2试样提取
半固体、固体试样：称取1.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加10mL2%乙酸溶液，涡旋混匀3min，超声提取10min，加10ml.甲醇涡旋混匀，超声提取5min后，转移至25mL容量瓶中， 用50%甲醇溶液（含1%乙酸）定容至刻度，混合均匀后，转移至50mL离心管中.8000r/min离心5min，收集上清液.
液体试样：称取2.5g（精确至0.01g）液体试样（饮料试样移取2.50mL）于50mL离心管中，加10mL2%乙酸溶液，涡旋混匀1min，加10mL甲醇涡旋混匀，超声提取10min后，转移至25mL容量瓶中，用50%甲醇溶液（含1%乙酸）定容至刻度，混合均匀后，转移至50mL离心管中，8000r/min离心5min，收集上清液.
5.3试样净化
半固体、固体试样：准确移取2.5mL上清液，加10mL水混匀；对于可可制品、巧克力及其制品需要加人10mL正已烷，振荡5min，静置或离心分层，去除上层正已烷后，加10mL水混匀.将混合溶液转移至预活化的固相萃取柱中，控制流速1mL/min~2mL/min，依次用5mL水、5mL10%甲醇水1.00mL50%甲醇溶液（含0.05%乙酸）溶解，经微孔滤膜过滤，滤液待上机测定.
液体试样：准确移取5mL上清液，加20mL水，将混合溶液转移至预活化的固相萃取柱中，控制流速1mL/min~2mL/min，依次用5mL水、5mL10%甲醇水淋洗，将固相萃取柱抽干，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液，置于50C水浴中，氮吹至近干.用1.00mL50%甲醇溶液（含0.05%乙酸）溶解，经微 孔滤膜过滤滤液待上机测定.
5.4空白试验
除不加试样外，采取完全相同的分析步骤，试剂和用量，进行同批次操作.
5.5仪器参考条件
5.5.1色谱柱：C，250mm×4.6mm.5μm，或相当者.5.5.2流动相A：甲醇；流动相B：0.1%乙酸溶液，梯度洗脱程序见表1.5.5.4流速:0.8 mL/min. 5.5.3柱温：35℃5.5.5检测波长：288nm.5.5.6进样量：10μl.
表1梯度洗脱程序
时间/min 流动相A/% 流动相B/%0 0 30 7015 0 30 7016.0 S6 520 0 95 520 1 30 7025 0 30 70
5.6标准工作曲线的制作
质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，二氢榭皮素标准溶液的液相色谱图参见附 将标准系列工作液分别注人液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作液中二氢郴皮素的录A.
5.7试样溶液的测定
将试样溶液注人液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准工作曲线得到试样溶液中二氢棚皮素的质量浓度.如果含量超过标准工作曲线范围，需对试样溶液稀释后进行检测.
6分析结果的表述
试样中二氢郴皮素含量按式（1）计算：
式中：
试样中二氢皮素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）：p X 试样溶液中二氢榭皮素的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；P 空白溶液中二氢皮素的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）：V 试样最终定容体积，单位为毫升（mL）：1 000 f 单位换算系数； 稀释倍数；一试样质量或体积，单位为克（g）或毫升（mL）.计算结果保留三位有效数字.
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
8其他
取样量为1g时，方法检出限为5.00mg/kg，定量限为10.0mg/kg.取样量为2.5g时，方法检出限为1.00mg/kg，定量限为2.00mg/kg.对于饮料（含固体饮料冲调后试样），方法检出限为1.00mg/L 定量限为2.00mg/L.
第二篇二氢皮素原料中二氢瓣皮素的测定液相色谱法
9原理
试样用甲醇溶解后，经C反相液相色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，外标法定量.
10试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
10.1试剂
10.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯.10.1.2乙酸（CHCOOH）：色谱纯.
10.2试剂配制
10.2.10.1%乙酸溶液：吸取1ml.乙酸，加水稀释至1000mL，混匀.
