ICS07.080 CCS B43 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5199—2020 家畜家禽成分DNA条形码检测技术规范 Inspection protocol for livestock-derived and poultry-derived ingredients with DNA barcode method 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5199—2020 前言 本文件按照GB/T1.1一2020的规定起草. 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中华人民共和国拱北海关、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国重庆 海关、中华人民共和国郑州海关、中华人民共和国南京海关、中华人民共和国厦门海关. 本文件主要起草人：罗宝正、薄清如、邵建宏、王勤、赵福振、吴绍强、廖秀云、吕继洲、徐 海聂、聂福平、陈轩、沙才华、郑传发、杨俊、苗丽、唐泰山、孔繁德. SN/T5199-2020 家畜家禽成分DNA条形码检测技术规范 1范围 本文件规定了家畜、家禽成分DNA条形码检测方法. 本文件适用于家畜、家禽单一物种样品的检测，不适用于多物种混合样品中动物成分的检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1.1 家畜livestock 人工饲养驯化且可以人为控制其繁殖的哺乳纲动物，如猪、牛、绵羊、山羊、马、驴、骡、骆 驼、兔、猫、狗等. 3.1.2 家禽poultry 人工饲养的为了获取其肉、卵和羽毛等的鸟纲动物，一般为雉科和鸭科动物，如鸡、鸭、鹅等， 也有其他科的鸟类如火鸡、鸽子、鹤鹑等. 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件. CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethyl ammonium bromide). Cytb:细胞色素b(cytochrome b) DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid). EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)o Na EDTA:乙二胺四乙酸二钠(ethylene diaminetetraacetie acid disodium salt) Tris:三羟甲基氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)aminomethane)o PCR:聚合酶链式反应(po...

ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5198—2019 熊蜂短膜虫检疫技术规范 Quarantine protocol for Crithidia bombi 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5198—2020 熊蜂短膜虫检疫技术规范 1范围 本文件规定了熊蜂短膜虫检疫的聚合酶链式反应和实时荧光聚合酶链式反应检测技术. 本文件适用于熊蜂短膜虫的检疫. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单） 适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. Ct 循环阈值(cycle threshold) DNA 脱氧核糖核酸(deoxyribonucleie acid) dNTP 三磷酸脱氧核苷酸(deoxynucleoside triphosphate) EB 溴化乙锭(ethidium bromide) ITS 内转录间隔区(internal transcribed space) PCR 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) TBE 三羟甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸(trihydroxymethyl aminomethane--boric acid- ethylene diamine tetraacetic acid TE TE缓冲液(Tris-EDTA buffer solution) 4设备、材料和试剂 4.1设备 4.1.1高压灭菌锅. 4.1.2梯度PCR扩增仪. 4.1.3荧光PCR仪. 4.1.4高速冷冻离心机（转速12000r/min) 4.1.5微量移液器. 4.1.6生物安全柜. 4.1.7DNA相对分子质量标准品(100bp~1000bp) 4.1.8水平电泳仪. 4.1.9凝胶成像系统. 4.1.10电子天平（感量0.01g). SN/T5198—2020 4.1.11冰箱(2℃~8℃和-20℃). 4.2试剂 4.2.1水：符合GB/T6682中一级水的规格. 4.2.2液氮. 4.2.3无水乙醚. 4.2.4无水乙醇. 4.2.50.01mol/L磷酸盐(PBS)缓冲液，配制方法见附录A中A.1. 4.2.610%SDS溶液，配制方法见附录A中A.2. 4.2.7蛋白酶K. 4.2.85mol/L的NaC1溶液，配制方法见附录A中A.3. 4.2.9CTAB/NaC1溶液，配制方法见附录A中A.4. 4.2.10三氯甲烷/异戊醇混合液，配制方法见附录A中A.5. ...

ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5196—2020 猪轮状病毒感染检疫技术规范 Quarantine protocol for infection with porcine rotavirus 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5196—2020 前言 本文件按照GB/T1.1一2020的规定起草. 本文件由中国人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中华人民共和国福州海关、中华人民共和国南京海关、中华人民共和国南宁 海关、中华人民共和国深圳海关、中华人民共和国海口海关、厦门瑞德利校准检测技术有限公司. 本文件主要起草人：张体银、姜焱、聂丹、郑腾、花群义、李丹丹、王武军、白泉阳、张志灯、 于师宇、陈美传. I SN/T5196—2020 猪轮状病毒感染检疫技术规范 1范围 本文件规定了猪轮状病毒感染酶联免疫吸附试验、反转录-聚合酶链反应和实时荧光反转录- 聚合酶链反应检测技术. 本文件适用于猪轮状病毒感染的抗体检测和病原核酸鉴定. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件： eDNA 互补脱氧核糖核酸(plementary deoxyribonucleie acid) Ct 循环阈值(cycle threshold) ddH O 双蒸水(couble-distillation H2O) DEPC 焦碳酸二乙酯(diethy pyrocarbonate) dNTP 三磷酸脱氧核苷酸(deoxynucleoside triphosphate) EB 溴化乙锭(ethidium bromide) ELISA 酶联免疫吸附试验(enzyme--linked immunosorbent assay) HRP 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase) OD值 光密度值(optic density value) PBS 磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline buffer) PRV 猪轮状病毒(porcine rotavirus) RNA 核糖核酸(ribonucleic acid) RT-PCR 反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction) TBE 三羟甲基氨基甲烷-硼...

ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5194—2020 羊传染性脓疱皮炎检疫技术规范 Quarantine protocol for contagious pustular dermertitis of sheep and goat 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5194—2020 羊传染性脓包皮炎检疫技术规范 1范围 本文件规定了羊传染性脓疱皮炎临床诊断、病毒分离、聚合酶链式反应和实时荧光聚合酶链式 反应检测技术. 本文件适用于羊传染性脓疱皮炎的检疫检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规程和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4生物安全措施 为了保护实验室人员的安全，应由通过生物安全培训并具备资质的工作人员进行检测，培 养物和废弃物应按照GB19489中的有关规定执行. 5试剂和材料 5.1所用水应符合GB/T6682中一级水的要求. 5.2犊牛睾丸原代细胞的制备（见附录A中A.1). 5.30.01mol/L(pH7.2)PBS(见附录A中A.2). 5.410%十二烷基硫酸钠（见附录A中A.3) 5.520mg/mL蛋白酶K(见附录A中A.4) 5.6引物与探针 根据羊传染性脓疱皮炎特异基因合成一套特异性引物.扩增产物大小为488bp. 引物1：5'-CGGCGTATTCTTCTCGGACT-3 引物2：5’-CGGACAGGTCCTTGACGATG-3 根据羊传染性脓疱皮炎特异基因合成一套特异性引物与配套探针. 引物1：5’-TGAACCGCTACAACACCT-3' 引物2：5-GAGTCCGAGAAGAATACGC-3 探针：FAM-AACTTCCACCTCAACCACTCCG-TAMRA SN/T5194-2020 5.7阳性对照：可溯源的标准毒株，或含目的片段的DNA亦可. 5.8分子生物学试剂：10×PCR缓冲液、dNTP(2.5mmol/L)、Tag DNA聚合酶(5U/uL)、ExTag Hs (5U/uL) 5.90.2mL和1.5mL塑料离心管. 5.10吸头，配套移液器使用. 5.11灭菌三角烧瓶：250mL 500mL. 6仪器和设备 6.1PCR仪. 6.2荧光PCR仪. 6.3电泳仪. 6.4凝胶成像系统. 6.5生化培养箱：-5℃±1℃~50℃±1℃. 6.6生物安全柜. 6.7电子天平：感量0.1g. 6.8均质器. 6.9生物显微镜. 6.1...

ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5193—2020 兔球虫病检疫技术规范 Quarantine protocol for rabbit coccidiosis 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5193-2020 兔球虫病检疫技术规范 1范围 本文件规定了兔球虫病检疫时的样品采集、病原形态学观察以及PCR检测等技术规范. 本文件适用于活兔、带肝脏兔胴体球虫感染情况的检测，也适用于兔养殖场兔球虫病的流行病 学调查和监测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规模和试验方法 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonueleie Acid) PCR:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) SDS:十二烷基硫酸钠(Sodium Dodecyl Sulfate) 4疫病概述 参见附录A. 5材料 5.1除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯.试验用水要求达到GB/T6682中一级水的要求. 5.2基因组DNA抽提试剂盒、PCR缓冲液、dNTP、DNA聚合酶、DNA Marker、蛋白酶K、氯化钠、 重铬酸钾、三氯甲烷、SDS、异丙醇、琼脂糖、无水乙醇等，均为商品化试剂. 5.3饱和氯化钠溶液、2.5%重铬酸钾溶液、0.5%SDS消化液、裂解液、20mg/L蛋白酶K溶液、 酚/三氯甲烷/异戊醇溶液、70%乙醇、3m0l乙酸钠溶液、电泳缓冲液、生理盐水的配制方 法见附录B. 5.4艾美耳球虫Eimeia spp.通用引物：ITS1-F:5-GGGAAGTTGCGTAAATAGA-3;ITS1-R: 5'-CTGCGTCCTTCATCGAT-3'.引物合成后均采用灭菌ddH20稀释为10mol/L(具体序列见 附录C). 5.5PCR检测阴阳性对照：阳性对照为11种兔球虫DNA基因组中的一种，阴性对照为健康兔肝 (肠)组织样品. 1 SN/T5193-2020 6仪器设备与耗材 天平、镊子、载玻片、漂浮管、自封袋、60目小铜筛、显微镜、制冰机、冰箱(4℃、-20℃、- 8O℃)、高压灭菌器、冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪或紫外透射仪、微量可调移液器及 吸头、1.5mL离心管等. 7检测方法 7.1样品采集 7.1.1肝脏、肠病灶样品采集 切取肝脏结节病灶、肠粘膜结节病灶组织，每份2g左右，装入干净的自封袋中，标明编号， 记录兔的年龄、品种、饲养卫生条...

ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5192—2020 嗜皮菌病检疫技术规范 Quarantine protocol for dermatophilosis 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5192-2020 嗜皮菌病检疫技术规范 1范围 本文件规定了嗜皮菌病的临床诊断、病原分离鉴定、分子生物学鉴定技术和血清学试验等检疫 技术. 本文件适用于动物嗜皮菌病的检疫和诊断. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T14926.43实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4生物安全措施 试验环境和防护要求见GB19489. 5临床诊断 5.1器材及消毒药物 5.1.1器材 工作服、乳胶手套、线手套、防护面具、口罩、风镜、反光镜、手电筒、煮沸消毒器、脸盆、 耳夹子. 5.1.2消毒药物 0.1%升汞水、2.5%来苏尔、0.1%新洁尔灭或75%酒精棉球等. 5.2检查方法 5.2.1检查者及助手均应穿工作服，戴好乳胶手套、口罩、风镜及防护面具，选择适当位置，对保定 好的动物进行检查. 5.2.2检查头部（尤其是唇部）、颈部、背部、胸腹部、四肢、会阴部、尾部是否出现浅表渗出性、局 限性的角质皮疹或硬痂. 5.2.3检查结束，脱掉手套，检查者及助手的手需用0.1%升汞水或2.5%来苏尔或0.1%新洁尔灭或 1 SN/T5192-2020 75%酒精棉球彻底消毒，工作服及用过的器材分别用2.5%来苏尔等浸泡1h 或煮沸10min消毒.检 疫现场用10%石灰乳、2%热火碱水或10%~20%漂白粉水溶液消毒. 5.3临床特征 出现特征性临床症状，如体表皮肤或黏膜出现渗出性皮炎、皮疹或硬痂，即可初步判定. 5.4判定 根据临床特征（见5.3）可做出初步诊断.进一步确诊应采集病料或血清样品进行实验室检查. 6病原分离与鉴定 6.1材料准备 6.1.1器材 组织捣碎机、恒温水浴箱、恒温生化培养箱、普通冰箱及低温冰箱(4℃、-20℃)、离心机及离 心管、普通生物显微镜、荧光显微镜、擦镜纸、手术刀、镊子、微量移液器、胶头滴管、载玻片、盖 玻片、接种环、酒精灯. 6.1.2培养基与试剂 甲醛、多粘菌素B、PBS(0.1mol/LpH7.2) 见附录A. 绵羊鲜血琼脂培养基（平板）或血清肉汤培养基（试管）、革兰氏染色液、姬姆萨染色液，按 GB/T14926.43规定配制. 6.2样品采集和运送 6.2.1样品采集 从病变部位无菌采...

ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5191—2020 禽肾炎检疫技术规范 Quarantine protocol for avian nephritis 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5191-2020 禽肾炎检疫技术规范 1范围 本文件规定了禽肾炎的病毒分离及鉴定、反转录-聚合酶链式反应、实时荧光反转录-聚合酶 链式反应和间接酶联免疫吸附试验的技术要求. 本文件适用于禽肾炎的检疫. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析试验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. AN:禽肾炎(avian nephritis); ANV:禽肾炎病毒(avian nephritis virus) 4临床诊断 4.1禽肾炎简介 禽肾炎简介参见附录A. 4.2临床症状 本病可明显抑制1月龄以内雏鸡生长发育和增重，其他症状不明显.一般呈一过性隐性感染，本病 经人工接种无特殊病原微生物雏鸡后，血浆中尿酸盐浓度高于正常浓度的2~10倍，21d后恢复正常. 4.3病理变化 本病的病理变化主要表现于肾脏，其他脏器一般没有变化.随年龄增大，病变程度减轻，4日龄 内的雏鸡病变最为严重，甚至会出现死亡情况.剖检死亡的雏鸡，见到肾脏、脾脏和腹膜表面及腿部 筋腱周围大量的尿酸盐沉积，2月龄仅发生较轻肾炎病变. 根据流行病学、临床症状和病理变化可做出禽肾炎的初步诊断，进一步的确诊有赖于实验室诊断. 5实验室诊断 5.1生物安全措施 1 SN/T5191-2020 试验环境和防护要求见GB19489. 5.2病原分离及鉴定 5.2.1材料和试剂 5.2.1.1器材 生物安全柜、离心机、二氧化碳培养箱、冷冻高速离心机、研磨器、倒置显微镜等. 5.2.1.2水 符合GB/T6682中一级水要求. 5.2.1.3试剂 胰酶消化液、细胞生长液、细胞维持液、双抗液，具体配制见附录B.1~B.4. 5.2.1.4细胞 鸡肾细胞(CKC). 5.2.2病毒分离培养 5.2.2.1样品采集和制备 5.2.2.1.1未出现临床症状时，活禽无菌采集病鸡泄殖腔拭子（需带有可见粪便）.雏禽采集新鲜粪便； 在动物死亡后，无菌采取肾脏和直肠内容物作病料. 5.2.2.1.2样品置于含抗生素的pH7.0等渗磷酸盐缓冲液(PBS)中. 5.2.2.1.3粪便和搅碎的组织，用含抗生素的PBS制成10%~20%（质量浓度的悬浮液，拭子浸入3mL...

ICS65.150 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5189—2020 鮰类肠败血症检疫技术规范 Quarantine protocol for Enteric septicemia of channel catfish 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T1589-2020 鮰类肠败血症检疫技术规范 1范围 本文件规定了类肠败血症的临床诊断、细菌分离、生化鉴定及聚合酶链式反应鉴定技术. 该文件适用于类肠败血症的临床诊断和实验室检疫. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SC/T7014水生动物检疫实验技术规范 SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范 SC/T7214鱼类爱德华氏菌检测方法 3术语、定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4临床诊断 4.1群体检查 发病鱼池往往水质较差，病鱼沿池边离群独游，反应迟钝，摄食量下降或不摄食.患病初期，病 鱼胸鳍侧常有直径为3mm~5mm的损伤，外部如针状的创伤，并深入到肌肉.有的病鱼头朝上、尾朝 下呈垂直状游动，部分病鱼有时呈痉李式的螺旋状游动，继而死亡. 4.2个体检查 因鱼规格和个体免疫力等差异，类肠败血症的临床症状不尽相同，主要表现出急性型和慢性 型两种形式. 急性型又称为肠道败血型，最为常见，死亡率高，主要表现为败血症和肠炎.病鱼体表出现褪色 斑，腹部肿胀，有的头部和躯体皮肤溃疡，一侧或两侧眼球突出，肌肉有点状出血或出血斑.鳃丝苍 白并有出血点，鳃盖、腹部、领部和鳍条基部皮肤出现瘀斑和出血，有的则出现白色斑点，肛门红肿， 后期病鱼出现全身性水肿. 慢性型又称为头盖穿孔型，病菌最初感染部位是鼻根的嗅觉囊，再经嗅觉器官移行到脑，形成肉 芽肿性炎症.后期头背颅侧部溃烂形成一个深孔，直到裸露出整个脑组织，形成似“马鞍”状的病灶； 随着病情的发展，病灶中心形成溃疡，表现为“头盖穿孔型”病症. 1 SN/T1589-2020 4.3解剖检查 剖开病鱼腹腔，内有大量含血或清亮的液体，流出的腹水不易凝固.肝水肿、质脆，有出血点和 灰白色的坏死灶；脾和肾肿大、出血；胃膨大；肠道扩张，肠粘膜水肿、充血、发炎，肠腔内充满气 体或淡黄色的水样液体；有时还伴随有套肠出现.脑组织形成肉芽肿，肌肉具弥散性肉芽肿性炎症. 4.4临床检查判定 群体检查和个体检查中出现以上病症，结合剖检结果，可以初步判断为疑似类肠败血症，需要 进一步进行实验室诊断. 5实验室诊断 5.1设备 5.1.1光学显微镜. 5.1.2培养箱(28℃±1℃和37...

ICS65.150 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5188—2020 迟缓爱德华氏菌病检疫技术规范 Quarantine protocol for edwardsiellasis 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5188—2020 迟缓爱德华氏菌病检疫技术规范 1范围 本文件规定了迟缓爱德华氏菌的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光PCR的检测 技术要求. 本文件适用于水生动物迟缓爱德华氏菌病检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. E.tarda:迟缓爱德华氏菌. 4迟缓爱德华氏菌病 迟缓爱德华菌病，是由迟缓爱德华菌引起的水生动物疾病的统称.鱼类感染后主要出现肠道败血 症和肝肾坏死病.迟缓爱德华氏菌病流行病学、临床症状、病理变化等资料参见附录A. 5病原分离与鉴定 5.1仪器设备 显微镜：10×~100×. 5.2培养基 5.2.1血琼脂：见B.1. 5.2.2营养琼脂：见B.2. 5.2.3硫酸亚铁琼脂：见B.3. 5.2.4半固体琼脂：见B.4. 5.2.5丙二酸钠培养基：见B.5. 5.2.6蛋白脉水：见B.6. 5.2.7葡萄糖蛋白胨培养基：见B.7. 5.2.8赖氨酸脱羧酶培养基：见B.8. 5.2.90NPG培养基：见B.9. 5.2.10糖发酵管：见B.10. SN/T5188-2020 5.2.11可使用商业化的培养基. 5.3病料的采集和处理 无菌采取适量患病动物肝、肾及病变组织，置于无菌离心管中，用无菌盐水冲洗，匀浆待用.如 不能立即进行检验，需将采集或处理的样品置4℃~8℃条件下保存，且不超过24h. 5.4分离培养 取样品匀浆，划线接种血琼脂平板，28℃±1℃培养24h~48h.从中挑取灰白色、圆形、湿润、 呈半透明状的单菌落在普通营养琼脂平板上纯化培养. 5.5染色镜检 将可疑菌进行革兰氏染色，于显微镜下观察.迟缓爱德华氏菌为革兰氏阴性短杆菌，无英膜，无 芽胞，大小约为(0.5Hm~1m)×(14m~3Hm). 5.6生化试验 5.6.1氧化酶试验 取白色洁净滤纸蘸取菌落，加1%盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加 深；再加1%α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性者于两分钟内不变色.或以毛 细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与前述相同. 5.6.2生化鉴定试验 氧化酶试验为阴性的可疑菌按附录C...

ICS05.150 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5186—2020 鲍脓疱病检疫技术规范 Quarantine protocol for abalone pustule disease 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5186-2020 鲍脓疱病检疫技术规范 1范围 本文件规定了鲍脓疱病的临床诊断、病原分离、生化鉴定、PCR检测法和荧光PCR检测法. 本文件适用于鲍脓疱病的病原检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4概述 鲍脓疱病由河弧菌感染所致，主要感染3cm~5cm的稚幼鲍，夏季连续高温季节发病频繁，持 续时间长，死亡率高，在海南省及全国各地造成极其严重的经济损失.河弧菌是一种嗜盐菌，革兰染 色阴性，顶端单鞭毛，具动力.本菌可产生肠毒素和细胞毒素.本菌对多数广谱抗菌药物敏感，但耐 青霉素及头孢类抗生素. 患脓疱病的鲍可见足肌上有若干个微微隆起的白色脓疱.脓疱的形状基本上为三角形，病灶是从 腹足的下表面开始逐渐扩大、深入到足的内部.开始时，病灶较小，随着病程的进展，病灶逐渐扩大. 临床检疫要求参见附录A. 5.试剂和仪器设备 5.1试剂 5.1.1除另有规定外，试验所需化学试剂均应为分析纯. 5.1.2试验用水应符合GB/T6682中一级水的规格，用于DNA提取及PCR试验的试验用水需用灭 菌双蒸水. 5.1.3培养基. SN/T5186-2020 5.1.4生化鉴定试剂：精氨酸二氢酶、赖氨酸脱梭酶、鸟氨酸脱梭酶、脲酶、糖发酵管、微量生化 管、生化鉴定试剂条或试剂盒等. 5.1.5细菌基因组提取试剂盒. 5.1.6PCR引物序列如下： —F1:5'-GCCTGACTCAAGCCATCTCAACCC-3'; —R1:5'-CTGTTGGTTGCCGTCATACTGCCT--3'. 5.1.7实时荧光PCR引物和探针： —F2:5’-GACGCTTGGCAGTGTTCAAC-3'; —R2:5'-GTGCATTCCACCATATTTTCTTACG-3'; —探针：5’(FAM)-TGTCAGCACGCCAATCAATCACCCG(TAMRA)-3'. ...

ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5185—2020 猪副伤寒检疫技术规范 Quarantine protocol for swine paratyphoid 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5185-2020 猪副伤寒检疫技术规范 1范围 本文件规定了猪副伤寒的临床诊断、病原的分离和鉴定、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应 和实时荧光聚合酶链式反应鉴定技术. 本文件适用于猪副伤寒临床诊断和实验室检疫. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. BSA牛血清白蛋白(bovine serum albumin) DNA脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid) dNTP三磷酸脱氧核苷酸(deoxynucleoside triphosphate) EB 溴化乙锭(ethidium bromide) ELISA酶联免疫吸附试验(enzyme--linked immunosorbent assay) HRP 辣根过氧化物酶(horseradish Peroxidase) LPS 脂多糖(lipopolysaccharide) PCR 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) TBE 三羟甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸(trihydroxymethyl aminomethane-boric acid- ethylene diamine tetraacetic acid 4临床诊断 4.1临诊症状 4.1.1急性败血性 体温突然升高(41℃~42℃)，精神不振，食欲废绝.呼吸困难，耳根、胸前和腹下皮肤有紫红 色斑点，后期或有下痢.有时在出现临诊症状后24h内死亡，但多数病程为2d~4d 病死率很高. 4.1.2亚急性和慢性 病猪体温升高(40.5℃~41.5℃)，精神不振，寒颤，喜钻垫草，扎堆，眼有粘性或脓性分泌物， 1 SN/T5185-2020 少数角膜混浊，严重者发展为溃疡，甚至眼球被腐蚀.病猪食欲不振，初便秘后下痢，粪便淡黄色或 黄绿色，恶臭.被毛粗乱，贫血，长期拉稀，粪便含纤维素、坏死组织或饲料凝块.有的皮肤出现弥 漫性湿疹.生长发育不良，呈典型僵猪. 4.2病理变化 4.2.1急性型 主要为败血症变化.脾常肿大，色暗带有蓝色，坚实似橡皮，脾髓质不软...

ICS10.040.65 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5184—2020 禽副伤寒检疫技术规范 Quarantine protocol for avian paratyphoid 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5184-2020 禽副伤寒检疫技术规范 1范围 本文件规定了禽副伤寒的临床诊断、病理学诊断、病原分离与鉴定技术、玻片凝集试验和聚合 酶链式反应(PCR法). 本文件适用于进出境活鸡或散养鸡禽副伤寒现场诊断与实验室诊断. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4生物安全措施 样品采集、样品处理及检验过程所涉及的实验操作和防护要求应符合GB19489的规定. 5诊断技术 5.1临床诊断 雏鸡副伤寒以急性败血型为主，往往孵出后不久很快死亡，看不到明显症状，10d左右的雏鸡 发病后，精神委顿，怕冷，头和翅膀下垂，羽毛松乱，喜欢拥挤在温暖的地方，食欲废绝，烦渴， 下痢，排出水样稀粪，肛门周围常被稀粪沾污.有的发生眼炎、失明，有的表现为呼吸困难.常在 1d~2d内死亡，死亡率10%~80%. 成年鸡感染后多不表现症状，成为慢性带菌者，肠道带菌的时间长达9~16个月.成年鸡感染后 厌食、下痢、脱水、全身衰弱、翅膀下垂和羽毛松乱，死亡率约1%，大部分能在短期康复. 5.2病理学诊断 剖检时，最急性的往往病变不显著，仅见肝脏淤血肿大，胆囊扩张，充满胆汁.病程稍长的病鸡 死后显现消瘦、失水、卵黄凝固的症状.肝脏、脾脏发生淤血、有出血条纹或针尖大灰白色坏死点. 肾脏淤血.有心包炎，心包液增多，含有纤维素性渗出物.小肠有出血性炎症，尤以十二指肠最严重， 盲肠扩张，肠腔中有时有淡黄或白色干酪样物质堵塞.1日龄以内幼雏常有肺炎病变. 1 SN/T5184-2020 5.3病原分离与鉴定 5.3.1试剂与材料 5.3.1.1非选择性增菌液：缓冲蛋白陈水(BP) 见A.1. 5.3.1.2选择性增菌液：亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)、四硫磺酸钠煌绿增菌培养基(TTB)、RVS大 豆蛋白陈增菌液(Rappaport-Vassiliadis soya peptone broth) 见A.2~A.4. 5.3.1.3非选择性琼脂平板：血琼脂平板，营养琼脂平板，见A.5~A.6. 5.3.1.4选择性琼脂平板：亚硫酸铋琼脂(BS)、胆硫乳琼脂(DHL)、HE琼脂(Hektoen Enteric Ag...

ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5183—2020 牛皮蝇蛆病检疫技术规范 Quarantine protocol for Bovine hypodermosis 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5183-2020 牛皮蝇蛆病检疫技术规范 1范围 本文件规定了牛皮蝇蛆病检疫时的临床症状检查、剖检检查和病原形态学鉴定以及酶联免疫吸 附试验(ELISA)等技术规范. 本文件适用于进出境活牛和牛皮张中牛皮蝇蛆的检疫，也适用于牛养殖场牛皮蝇蛆病的流行病 学调查和监测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4疫病概述 牛皮蝇蛆病(Bovine hypodermosis)是由皮蝇科(Hypodermine)、皮蝇属(Hypoderma)的牛皮 蝇(H.bovis)、纹皮蝇(H.lineatum)和中华皮蝇(H.sinense)寄生于牦牛或黄牛体内而引起的一种寄 生虫病.本病的危害主要表现为牛皮穿孔，肉、奶产量降低且品质下降，感染强度高的可致动物死亡. 牛皮蝇蛆病现已报道的病原分属于10属中的39种，特异性的宿主为牛属动物的黄牛、牦牛、犏 牛和水牛，但有时也可感染马等其他家畜和人，而且能够发育成熟.鉴于本病对畜牧业的严重危害， 世界上许多国家在上世纪二三十年代便启动了皮蝇蛆病控制与扑灭行动，并将消灭皮蝇蛆病立法加以 强制执行.皮蝇蛆病流行范围广，在北纬18~60°范围内的55个国家都有本病的流行.我国牛皮蝇 蛆病的地理分布主要在东北、华北、西北等地区的农牧区，这些农牧区的牛皮蝇蛆病尤为严重.在流 行区内，感染率达80%以上，严重感染地区高达98%~100%，特别是1~3岁的犊牛易受感染，4岁 以上牛发病率降低. 5材料与试剂 除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯.试验用水应达到GB/T6682中一级水的要求. 牛皮蝇病抗体检测试剂盒：本标准以商品化试剂盒Bovine Hypodermosis Antibody Test Kit为例 进行操作，也可采用经过验证、检测效果确实的其他牛皮蝇蛆病ELISA检测试剂盒. SN/T5183-2020 6设备 6.1体视显微镜. 6.2酶标仪. 6.3-20℃普通冰箱、4℃冰箱. 6.4高压灭菌锅. 6.5离心管、微量移液器及配套的吸头、玻璃培养皿及解剖针. 6.6恒温培养箱. 7临床症状检查 7.1适用范围 适用于进出境隔离检疫期间活牛感染牛皮蝇蛆的检疫. 7.2...

ICS65.150 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5181—2020 金鱼造血器官坏死病检疫技术规范 Quarantine protocol for gold fish haematopoietic necrosis 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5181-2020 金鱼造血器官坏死病检疫技术规范 1范围 本文件规定了检测鲤疱疹病毒2型的临床症状，检测的器材和设备，试剂和材料，采样，诊断方 法及综合判定. 本文件适用于金鱼造血器官坏死病的诊断、监测和检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语、定义和缩略语 本文件没有需要界定的术语和定义.下列缩略语适用于本文件. GFHN(golden fish haematopoietie necrosis):金鱼造血器官坏死. CyHV2(cyprinid herpesvirus2):鲤疱疹病毒2型. Ct(cycle threshold):循环阈值. CTAB(hexadecyl trimethyl ammonium bromide):十六烷基三甲基溴化胺. DNA(deoxyribonucleic acid):脱氧核糖核酸. dNTPs(deoxynucleotide triphosphates):三磷酸脱氧核糖核苷酸. PCR(polymerase chain reaction):聚合酶链式反应. 4概述 金鱼造血器官坏死病(Gold Fish Haematopoietic Necrosis GFHN)是由鲤疱疹病毒2型(Cyprinid Herpesvirus2 CyHV2)感染金鱼和鲫鱼等鲤科鱼类并引起发病的一种病毒性传染病（参见附录A). 5临床症状 金鱼等感染GFHNV后，表现为昏睡、食欲不振或废绝，鳃丝发白.濒死鱼可见大量血液从 鳃盖下缘自然溢出，体表充血，腹部肿胀，眼眶基部充血.解剖后，可见肌肉出血，脾肾不同程 度出血，肝脾肿大，鳔点状出血. 1 SN/T5181-2020 6器材和设备 6.1普通冰箱和超低温冰箱. 6.2制冰机. 6.3无菌组织研磨器. 6.4二级生物安全柜. 6.5冷冻高速离心机. 6.6PCR仪. 6.7水平电泳仪. 6.8凝胶成像仪. 6.9实时荧光PCR仪. 6.10不同规格的微量移液器，量程包括0.5uL~10pL、10L~100uL、100uL~1000L. 6.11高压灭菌器. 6...

ICS11.020 CCS C62 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5180—2021 微小病媒生物无损伤制备基因组 DNA方法 Protocol for obtaining high quality genome DNA from tiny vector without damaging morphology of the vouchers 2021-06-18发布 2022-01-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5180-2021 前言 本文件按照GBT1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草. 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中华人民共和国拱北海关、中华人民共和国郑州海关. 本文件主要起草人：邱德义、陈健、张勤、魏晓雅、刘德星、李婷婷、岳巧云. SN/T5180-2021 微小病媒生物无损伤制备基因组 DNA方法 1范围 本文件规定了微小病媒生物的基因组DNA制备方法，包含对标本的前处理、消化、裂解、提取、 纯化基因组DNA的操作程序. 本文件适用于利用DA条形码等分子生物学技术对微小病媒生物进行种类鉴定或者其他需获取 病媒生物基因组DNA的工作. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程 SN/T2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员 SN/T4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程 SN/T4629检疫性有害生物凭证标本核酸制备、保存与管理规范 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 微小病媒生物tiny vector 体型微小，难以通过部分组织获取足量基因组DNA进行后续分子鉴定的病媒生物.常见的种类 有蜱、螨、蚤、虱等. 3.2 无损伤制备基因组DNA obtaining genome DNA without damaging morphology of the vouchers 在提取基因组DNA的过程中，对样本外观不造成损害，处理后的样本仍保持外观的完整性和可 识别的形态特征，仍可采用形态学鉴定方法对其进行种类鉴定的基因组DNA的制备方法. 4要求 实验室的生物安全应符合GB19489要求，实验室人员防护应符合SNT2752.4的要求，实验中用 水应符合GB/T6682的要求，PCR扩增检测应符合SN/T4278和WS/T230的要求. ...

ICS11.020 CCS C62 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5179—2021 二代测序法检测蜚蠊携带细菌性样品 制备方法 Protocol for sample preparation of cockroach-borne bacteria detection with next-generation sequencing 2021-06-18发布 2022-01-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5179—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草. 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中华人民共和国拱北海关. 本文件主要起草人：陈健、邱德义、刘恭源、魏晓雅、刘德星、李婷婷、岳巧云. I SN/T5179—2021 二代测序法检测蜚蠊携带细菌性样品 制备方法 1范围 本文件规定了蜚蠊携带细菌性样品进行二代测序检测的样本采集、前处理、体内外携带细菌的 收集及基因组DNA的获取和扩增等操作程序. 本文件适用于利用二代测序技术对本底调查或口岸截获的蜚蠊携带未知细菌进行高通量检测鉴 定的样品制备工作. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单） 适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员 SN/T4278一2015国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 引物标记primer marker 在常规引物5'端加入的一段6~12个随机设计的碱基序列，用于标记并区分特定样品的扩增反应. 3.2 标签引物labeled primer 由引物标记加常规引物两部分构成，每一个样品进行PCR扩增时需保证使用的一对引物中，至 少有一条与其他样品使用的引物标记不同. 3.3 高成功率PCR酶high success rate PCR polymerase 可成功扩增普通Tag DNA聚合酶难以扩增样品的一类新型DNA聚合酶.针对含多种PCR扩增抑 制物质的粗样品，该酶具有优良的延伸性.常见的有KOD FX系列等. 4要求 实验室的生物安全应符合GB19489要求，实验室人员防护应符合SNT2752.4要求，实验中用水 1 ...

ICS11.020 CCS C62 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5178—2021 按蚊属分子鉴定方法 Molecular identification for genus Anopheles 2021-06-18发布 2022-01-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5178—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草. 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中华人民共和国南京海关、中华人民共和国福州海关、中华人民共和国北京 海关、中国检验检疫科学研究院. 本文件主要起草人：杨庆贵、何江、朱军、吴瑜凡、孙立新、张建庆、郭惠琳、黄恩炯、胡双双、 聂国媛、袁大炜、郭天宇、陆永昌. I SN/T5178-2021 按蚊属分子鉴定方法 1范围 本文件规定了按蚊(Anopheles Meigen.1818)成虫（包括肢体残缺不全的成虫）及蛹、幼虫、卵的. 本文件适用于按蚊属分子的鉴定. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程 SN/T2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员 SN/T4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程 SN/T4629检疫性有害生物凭证标本核酸制备、保存与管理规范 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 3术语和定义 SN/T4629和SN/T4278界定的术语和定义适用于本文件. 4原理 利用BOLD中规定的通用引物对线粒体DNA中的COI基因的特定片段进行扩增，PCR产物克隆 或者直接测序后，得到长度不少于500bp的有效序列，跟BOLD系统中的数据进行比对，从而达到 物种快速准确鉴定的目的. 5引物 LCO1490 5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3' HCO21985'-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’ 6鉴定程序 6.1准备 实验室需具备的设备和试剂见附录A 实验室生物安全应符合GB19489(部分)中的规定， 人员防护应符合SN/T2752.4(部分)中的的规定；PCR防污染措施应按照WS/T230确定的执行. 1 ...

ICS11.020 CCS C62 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5177—2021 国境口岸寨卡病毒实时荧光RT-PCR 检测方法 Real-time RT-PCR method for detecting Zika Virus at frontier ports 2021-06-18发布 2022-01-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5177-2021 前言 本文件按照GBT1.1一2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草. 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院、杭州富集生物科技有限公司. 本文件主要起草人：刘丽娟、王静、张晓龙、慈颖、马爱敏、曹晓梅、杨宇、张丽萍、胡孔新. I SN/T5177-2021 国境口岸寨卡病毒实时荧光RT-PCR 检测方法 1范围 本文件规定了国境口岸寨卡病毒实时荧光RT-PCR检测方法的生物安全要求，样本的采集、运 输、寨卡病毒实时荧光RT-PCR检测方法和现场快速检测方法. 本文件适用于国境口岸人出境人员疑似寨卡病毒的核酸检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）租 用于本文件. GB19489实验室生物安全通用要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 人间传染的病原微生物名录（中华人民共和国卫生部卫科教发〔2006]15号） 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定（中华人民共和国卫生部令第 45号) 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1寨卡病毒Zika virus 一种黄病毒科黄病毒属病毒，呈球形，直径约为40nm~70nm 有包膜.基因组为单股正链RNA 长度为10.8K，分为亚洲型和非洲型.寨卡病毒抵抗力不详，但黄病毒属病毒一般不耐酸、不耐热， 60℃30min可灭活，70%乙醇、0.5%次氯酸钠、脂溶剂、过氧乙酸等消毒剂及紫外照射均可灭活. 3.2送转录聚合酶链反应reverse transcription polymerase chain reaction RT-PCR 将RNA的逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术.本标准采用一步法 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)在一步法RT-PCR中，首先以RNA为模板，利用下游特异性引物， 在依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）的作用下转录合成互补DNA(CDNA) 该步骤称作“逆转录”； 随后，再以cDNA为模板，利用上游和下游特异性引物，在DNA聚合酶的作用下进行PCR循环扩增； 最终使RNA分子的某个特定区...

ICS11.020 CCS C62 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5176—2021 国境口岸传染病快速检测技术规范 Rapid test codes for infectious disease at frontier port 2021-06-18发布 2022-01-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 国境口岸传染病快速检测技术规范 SN/T5176—2021 水 中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲1号(100023) 编辑部：(010)65194242-7531 网址.customskb./hook 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 开本880×12301/16印张0.75字数22千字 2021年7月第一版2021年7月第一次印刷 印数1一500 书号：155175106定价：14.00元 SN/T5176-2021 前言 本文件按照GBT1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草. 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中华人民共和国福建国际旅行卫生保健中心、中华人民共和国四川国际旅行 卫生保健中心、中华人民共和国上海国际旅行卫生保健中心、中华人民共和国北京国际旅行卫生保健 中心. 本文件主要起草人：王宇平、郑晖、郑爱萍、石莹、陆晔、杨美琼、刘翌、高博. I ...

ICS11.020 CCS C62 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5175—2021 国境口岸蚊类DNA条形码鉴定规程 Identification codes for mosquitos with DNA barcoding at frontier ports 2021-06-18发布 2022-01-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5175-2021 前言 本文件按照GBT1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任. 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本文件起草单位：中华人民共和国福州海关. 本文件起草人：高博、方义亮、张建庆、王宇平、黄恩炯. SN/T5175-2021 国境口岸蚊类DNA条形码鉴定规程 1范围 本文件规定了国境口岸蚊类DNA条形码鉴定方法中DNA提取、基因的扩增及序列的比对分析、 结果判定等. 本文件适用于国境口岸蚊类中成虫、幼虫、蛹、残肢不全等标本的DNA条形码鉴定. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程. SN/T2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员 SN/T4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1ITS2基因ITS2gene 172基因核糖体内转录间隔区2，变异速度适中，能够提供较丰富的变异位点和信息位点，位于 5.8S与28S之间，可应用于种团、复合体之间进行鉴定. 4方法原理 基于线粒体CO1基因序列对蚊类进行鉴定，确定种内差异、种间差异，结合核糖体ITS2基因对 种团、复合组进行鉴定. 5仪器设备、试剂与实验准备 5.1仪器设备 生物安全柜、高压灭菌锅、离心机、微量分光光度仪、PCR仪、电泳设备、凝胶成像系统等. 5.2主要试剂 动物组织基因组DNA提取试剂盒、PCR Premix、超纯水、DNA标准分子量标(DL2OOO) 1 ...