ICS11.220 CCS B41 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5194—2020 羊传染性脓疱皮炎检疫技术规范 Quarantine protocol for contagious pustular dermertitis of sheep and goat 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5194—2020 羊传染性脓包皮炎检疫技术规范 1范围 本文件规定了羊传染性脓疱皮炎临床诊断、病毒分离、聚合酶链式反应和实时荧光聚合酶链式 反应检测技术. 本文件适用于羊传染性脓疱皮炎的检疫检测. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规程和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. 4生物安全措施 为了保护实验室人员的安全，应由通过生物安全培训并具备资质的工作人员进行检测，培 养物和废弃物应按照GB19489中的有关规定执行. 5试剂和材料 5.1所用水应符合GB/T6682中一级水的要求. 5.2犊牛睾丸原代细胞的制备（见附录A中A.1). 5.30.01mol/L(pH7.2)PBS(见附录A中A.2). 5.410%十二烷基硫酸钠（见附录A中A.3) 5.520mg/mL蛋白酶K(见附录A中A.4) 5.6引物与探针 根据羊传染性脓疱皮炎特异基因合成一套特异性引物.扩增产物大小为488bp. 引物1：5'-CGGCGTATTCTTCTCGGACT-3 引物2：5’-CGGACAGGTCCTTGACGATG-3 根据羊传染性脓疱皮炎特异基因合成一套特异性引物与配套探针. 引物1：5’-TGAACCGCTACAACACCT-3' 引物2：5-GAGTCCGAGAAGAATACGC-3 探针：FAM-AACTTCCACCTCAACCACTCCG-TAMRA SN/T5194-2020 5.7阳性对照：可溯源的标准毒株，或含目的片段的DNA亦可. 5.8分子生物学试剂：10×PCR缓冲液、dNTP(2.5mmol/L)、Tag DNA聚合酶(5U/uL)、ExTag Hs (5U/uL) 5.90.2mL和1.5mL塑料离心管. 5.10吸头，配套移液器使用. 5.11灭菌三角烧瓶：250mL 500mL. 6仪器和设备 6.1PCR仪. 6.2荧光PCR仪. 6.3电泳仪. 6.4凝胶成像系统. 6.5生化培养箱：-5℃±1℃~50℃±1℃. 6.6生物安全柜. 6.7电子天平：感量0.1g. 6.8均质器. 6.9生物显微镜. 6.1...
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