ICS65.020.01 B04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3346-2019 马铃薯抗青枯病鉴定技术规程 Technical code of practice for evaluation of potato resistance to bacterial wilt 2019-01-17发布 2019-09-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3346-2019 马铃薯抗青枯病鉴定技术规程 1范围 本标准规定了马铃薯抗青枯病(bacterial wilt)鉴定方法与评价标准. 本标准适用于马铃薯(Solanum tuberosum L.)品种和材料对青枯病抗性的室内鉴定及评价. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 是注期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 ING RESE 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版不包括的修饮单用于本文件. NY/T1858.4番茄抗青枯病鉴定技术规程 SN/T1135.9马铃薯青枯病菌检疫鉴定方法 3术语和定义 NY/T1858.4界定的以及下列术语和定义适用于体文件 3.1 马铃薯青枯病 Potato bacterial wilt 由茄科劳尔氏菌[Rulstonia(Smith)Yabruchi et al.侵染马铃薯植株引起的一种全 株性萎蔫的细菌性维东病害.病害状及病原菌生物学性状参见附录A 3.2 D 刘C工 生理小种physiological race 病原物种内在形态上无差异，但在不同种植物和品种上具有显著致病性差异的类群 4试剂与材料 除非另有说明，本方决所用试剂均为分析纯或生化试剂 I⊥N3O 4.1TTC(2 3 5-氯化基四氨唑)母液 称取1gTTC浴于100L蒸馏水中，完全溶解后用细菌过滤器过滤 颜保存于4℃的棕色试剂 瓶中备用. 4.2培养基 培养基包括青枯菌培养基和马铃薯组培苗培养基.各种培养基的配方及配制方法见附录B. 4.3对照材料 以马铃薯‘米拉’或合作-88’等感病品种为感病对照. 4.4育苗基质 直接购买商品化蔬菜育苗基质.亦可将草炭、蛭石和菜田土按体积2：1：1的比例混合均匀，于 (134士1)℃湿热灭菌1h. 4.5其他用品 培养皿、离心管、枪头、冻存管、手术刀、剪刀、移植环、烧杯、量筒、试剂瓶、锥形瓶、酒精灯、组培苗培 养盒、育苗钵等. 5仪器设备和设施 恒温光照培养箱、高压灭菌锅、移液器、电子天平、超净工作台、冰箱、人工接种鉴定室等. 1 NY/T3346—2019 6材料育苗 育苗包括试管苗培养和盆栽育苗，见附录C. 7接种体制备 7.1青枯病菌分离、纯化 按照SN/T1135.9的规定进行青枯病菌的分离、纯化、鉴定和保存. 7.2接种体繁殖、制备 选择马铃薯青枯菌的优势小种生理小种3号作为接种病原菌，小种鉴定方法参见附录D.用接种 环蘸取菌液在TTC培养基平板上划线，在28℃恒温培养箱中培养48h后，挑取边缘乳白色、中间部位 淡红色、流动性好的毒性单菌落，移入青枯菌液体培养基中，28℃200r/min振荡培养16h~18h 加适 量无菌水配成接种的病菌悬浮液. 8鉴定方法 8.1试管苗接种鉴定 8.1.1接种时期 在组培苗培养基中培养3周的试管苗. 8.1.2接种浓度 约1X10CFU/mL(OD6o=0.1). 8.1.3接种方法 采用伤根接种法.选用生长一致的马铃薯试管苗3盒，试管苗繁殖见C.1.3 使用手术刀片于无菌 环境下围绕植株根部在培养基划“#”伤根，随后每盒试管苗注人接种菌液5L.每份材料设3个重 复...
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