GB 31610.6-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中曼氏迭宫绦虫裂头蚴的检验.pdf

GB 中华人民共和国国家标准 GB31610.6—2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中 曼氏迭宫绦虫裂头蚴的检验 2023-09-06发布 2024-03-06实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 国家市场监督管理总局 GB31610.6-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中 曼氏迭宫绦虫裂头蚴的检验 1范围 本标准规定了动物性水产品及其制品中曼氏迭宫绦虫(Spirometra mansoni)裂头蚴的形态学和 PCR检验方法. 本标准适用于动物性水产品及其制品中曼氏迭宫缘虫裂头蚴的检验. 2原理 动物性水产品及其制品中的曼氏迭宫缘虫裂头呦主要寄生于蛙等水产品的肌肉内.解剖分离获得 虫体，根据裂头蚴的形态结构，初步判断裂头蚴种类；通过扩增曼氏迭宫绦虫裂头呦线粒体DA的细 胞色素氧化酶(coxI)基因片段并测序，进行曼氏迭宫绦虫裂头呦的鉴定. 3仪器和设备 3.1生物显微镜：40×~100×. 3.2体视显微镜：7.5×~150×. 3.3PCR扩增仪. 3.4凝胶成像系统. 3.5电泳仪. 3.6高速离心机：转速≥12000r/min. 3.7微量移液器：0.2gL~2.5gL、1gL~10gL、10gL~100L、100gL~1000gL 4试剂和材料 4.1试剂 4.1.11mol/L Tris-HCl溶液(pH8.0). 4.1.20.5mol/L EDTA溶液(pH8.0). 4.1.310%SDS溶液. 4.1.45mol/L NaCI溶液. 4.1.520mg/mL蛋白酶K. 4.1.6苯酚/三氯甲烷/异戊醇(25：24：1). 4.1.7三氯甲烷. 4.1.85U/uL耐热DNA聚合酶. 4.1.910×PCR缓冲液. 4.1.10 25 mmol/L MgCl2. GB31610.6-2023 4.1.11 dNTPs:dATP、dTTP、dCTP、dGTP 每种浓度为2.5mmol/L. 4.1.12琼脂糖：电泳级. 4.1.1350XTAE缓冲液，使用前用去离子水稀释成1XTAE缓冲液. 4.1.141×TE溶液(pH8.0). 4.1.1510mg/mL.溴化乙锭(EB)或其他核酸染料. 4.1.166×上样缓冲液. 4.1.17100bp~2000 bp DNA分子量标准. 4.1.18引物：浓度为10moL/L. 正向引物SEF3:5'-AATTCTTTCTGCTTGTGTGT-3' 反向引物SER1:5'-ATCAACAAATAATCCACGCAC-3' 扩增曼氏迭宫绦虫裂头呦corI基因片段长度为475bp. 4.2试剂配制 4.2.1生理盐水：称取8.5 g NaCl溶解于900mL去离子水，加去离子水至1000mL. 4.2.21mol/L Tris-HC1溶液：称取121.1 g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解于800mL去离子水，用盐 酸调节pH至8.0，加去离子水至1000mL. 4.2.30.5mol/L EDTA溶液：称取186.1gNa2EDTA2H2O(二水合乙二胺四乙酸二钠)溶解于 800mL去离子水，搅拌溶解，用NaOH调节pH至8.0，加去离子水至1000mL. 4.2.45mol/L NaCI溶液：称取292.5gNaC1溶解于900mL去离子水，加去离子水至1000mL. 4.2.5裂解液：10%SDS溶液100mL、1mol/L Tris-HC1溶液10mL、0.5mol/L EDTA溶液200mL、 5mol/L.NaCl溶液20mL 加灭菌去离...