BJS
食品补充检验方法
BJS 202506代替BJS201715
食品中碱性橙2等6种染料的测定
国家市场监督管理总局 发布
前言
本方法代替BJS201715《豆制品中碱性橙2的测定》.
增加了水产品、肉制品、调味品、加工坚果与籽类等基质； 一方法名称改为”食品中碱性橙2等6种染料的测定”：增加了碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、硫黄素T和酸性橙Ⅱ：一更改了方法的前处理方法及仪器参考条件：一增加了结果表述.
食品中碱性橙2等6种染料的测定
1范围
本方法规定了食品中碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、硫黄素T和酸性橙Ⅱ的液相色谱串联质谱测定方法.
本方法适用于水产品、豆制品、肉制品、调味品、加工坚果与籽类等食品中碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、硫黄素T、酸性橙Ⅱ的测定.
2原理
试样经乙酸-乙酸铵溶液、乙超声提取，经分散固相萃取净化，采用液相色谱-申联质谱检测，基质匹配外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯. 3.1.1乙晴（CHCN)：色谱纯.3.1.3氯化钠（NaCl).3.1.4乙酸铵（CHCOONH，）：色谱纯.3.1.5冰乙酸（CHCOOH）.
3.1.6无水硫酸镁（MgSO）.
3.2试剂配制
3.2.1乙晴溶液（5050.体积比）：量取50mL乙（3.1.1）和50mL水，混匀.3.2.20.1%甲酸溶液：移取0.5mL甲酸（3.1.2)，用水稀释至500mL，混匀.3.2.3含0.4%乙酸的20mmol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵（3.1.4），加人适量水溶解，再加人 2mL冰乙酸（3.1.5），用水稀释至500mL，混匀.
3.3标准品
碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、硫黄素T、酸性橙Ⅱ标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式和相对分子质量见附录A，纯度均≥95%，或经国家认证并授子标准物质证书的标准品.
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液：称取碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、硫黄素T、酸性橙Ⅱ标准品（3.3）各10mg（精确至0.01mg），分别用少量乙晴溶液（3.2.1）溶解，转移至10mL棕色容量瓶用乙晴（3.1.1）定容，摇匀，制成浓度为1.0mg/ml.标准储备液.一18℃以下避光保存，有效期6个月.
BJS 202506
3.4.2混合标准中间液A：分别准确移取碱性橙2标准储备液0.2mL碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、硫黄素T标准储备液各0.1mL.酸性橙Ⅱ标准储备液0.4mL.置于同一100mL容量瓶中，用乙晴（3.1.1）定容至刻度，混匀.准确移取1.0mL置于10mL棕色容量瓶中，用乙晴定容至刻度混匀，配制成浓度碱性橙2为200ng/mL，碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、硫黄素T为100ng/mL，酸性橙Ⅱ为400ng/mL的混合标准中间液A.0℃～4℃C避光保存，有效期1个月.
3.4.3混合标准中间液B：准确移取上述混合标准中间液A（3.4.2)1.0mL置于10mL棕色容量瓶中， 用乙晴定容至刻度，混匀，配制成浓度碱性橙2为20ng/mL，碱性橙21、碱性橙22、碱性嫩黄、硫黄素T为10 ng/mL 酸性橙ⅡI为40ng/mL的混合标准中间液B，临用现配.
3.4.4基质匹配混合标准工作溶液：分别取混合标准中间液B（3.4.3）和混合标准中间液A（3.4.2）适量，用空白基质提取液（5.3）稀释，配制成基质匹配混合标准工作溶液，其中碱性橙2浓度为0.4ng/ml1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、10 ng/mL 20 ng/ml、30 ng/mL 碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素T浓度均为0.2 ng/mL0.5 ng/mL1.0 ng/mL5.0 ng/mL10 ng/mL、15 ng/mL 酸性橙I为0.8 ng/mL、工作溶液，临用现配.
3.5材料
3.5.1N-丙基乙二胺（PSA);40μm~100μm. 3.5.2八烷基硅烷键合硅胶（C）：40μm~100m.3.5.3聚四氟乙烯滤膜：0.22μm
4仪器和设备
4.2天平：感量分别为0.01mg和1mg. 4.1液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ES1）.4.3涡旋混合器.4.4超声波发生器：≥40 kHz，4.6匀浆机. 4.5离心机：≥9 000 r/min 4.7组织捣碎机.
5分析步骤
5.1试样制备和保存
浆机均质后，装人密封洁净容器中，一18C以下冷冻保存，备用.
豆制品、肉制品、固体或半固体调味品等试样：取具代表性的试样约200g用匀浆机均质后装人密封洁净容器中，于一18℃以下冷冻保存，备用.
液体调味品等试样：试样先充分搅拌均匀，再取具代表性的试样约200g，装入密封洁净容器中，于一18C以下冷冻保存，备用.
加工坚果与籽类试样：取具代表性的试样（带壳试样不去壳）约200g，经组织捣碎机捣碎，将其搅拌均匀，装入密封洁净容器中，于一18C以下冷冻保存，备用.
5.2样品前处理
5.2.1提取
称取1g试样（精确至0.001g）于50mL具塞离心管内.加人2.5mL乙酸-乙酸铵溶液（3.2.3）.涡旋混匀1min），静置分层，9000r/min离心10min，取6mL上清液于15mL离心管内，加人约0.5g氯化钠（3.1.3），于-18C以下冷冻2h，分层，取出后9000r/min离心5min，取上清液，待净化.
5.2.2净化
取上清液1.5mL移人2mL离心管中，加人10mgPSA（3.5.1）、10mgC（3.5.2）、50mg无水硫酸镁（3.1.6），涡旋振荡1min，9000r/min离心5min.取上清液过0.22μm聚四氟乙烯滤膜（3.5.3），供液相色谱-申联质谱测定.
5.3空白基质提取液的制备
分别准确称取适量与试样基质相同或相近的低于本方法检出限的阴性样品1g（精确至0.001g），按试样同法（5.2）制备，混合制备溶液作为空白基质提取液，用于基质匹配混合标准工作溶液(3.4.4）制备.
5.4仪器参考条件
5.4.1液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C柱，3μm，2.1mm×150mm，或性能相当者；b）流动相：A为0.1%甲酸溶液（3.2.2），B为乙晴（3.1.1），梯度洗脱条件见表1；c）流速：0.3mL/min；e）进样量：5 jL. d）柱温：30℃C；
表1液相色谱梯度洗脱条件
时间/min 流动相A/% 流动相B/%0 0 0°06 10 01.0 90 0 10.07 0 5.0 95 010 0 5 0 95.011.0 90 0 10 014 0 90 0 10.0
5.4.2质谱参考条件如下：
a）离子源：电喷雾离子源（ES1源）；b）监测方式：多反应监测（MRM）；c）扫描方式：正离子扫描/负离子扫描： d）其他质谱参考条件见附录B.
