中华人民共和国国家标准
GB 5009.22-2026
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB5009.22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》.与GB5009.22-2016相比，主要技术变化如下：
修改了液相色谱-柱后衍生法和液相色谱-质谱/质谱法的顺序、试样制备和试样提取； 修改了标准的适用范围：修改了液相色谱-柱后衍生法、液相色谱-柱前衍生法和液相色谱-质谱/质谱法的检出限和定量限：删除了薄层色谱法.
食品安全国家标准
食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定
1范围
本标准规定了食品中黄曲霉毒素B、黄曲霉毒素B、黄曲霉毒素G和黄曲霉毒素G（以下分别简称AFB、AFB、AFG和AFG）的测定方法.
本标准第一法液相色谱-柱后衍生法和第三法液相色谐-质谱/质谱法适用于食品中AFB、AFB、AFG:和AFG：的测定.
本标准第四法酶联免疫吸附法适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFB的筛查测定.
第一法液相色谱-柱后衍生法
2原理
试样经乙晴-水溶液提取，免疫亲和柱净化液相色谱-荧光检测器检测，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙晴（CHCN).3.1.2氯化钠（NaCl）.3.1.4磷酸二氢钾（KHPO）. 3.1.3磷酸氢二钠（NaHPO ）（或十二水磷酸氢二钠，NaHPO12HO）.3.1.5氯化钾（KC1）.3.1.6盐酸（HCI).3.1.8甲醇（CHOH）：色谱纯. 3.1.7吐温20（C HO).3.1.9丙三醇（CHO）.3.1.10乙晴（CHCN）：色谱纯.3.1.11碘衍生试剂：碘（1）. 3.1.12溴衍生试剂：三溴化毗啶（C;HBr：N）.3.1.13电化学衍生试剂：澳化钾（KBr）、浓硝酸（HNO）.
3.2试剂配制
3.2.1乙晴-水溶液A（8416)：量取16mL水加人84mL乙晴中，混匀.
3.2.2乙晴-水溶液B（7030）：量取30mL水加人70mL乙晴中，混匀.3.2.3磷酸盐缓冲溶液：称取8.00g氯化钠，1.20g磷酸氢二钠（或3.02g十二水磷酸氢二钠）.0.20g磷酸二氢钾，0.20g氯化钾，用900mL水将上述试剂溶解，测试溶液pH，需要时，使用1mol/L盐酸溶液调节pH至与免疫亲和柱相匹配，加水稀释至1000mL，混匀.3.2.41mol/L盐酸溶液：量取8.6mL盐酸，加入80mL水中，冷却后定容至100mL. 3.2.51%吐温-20-磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBST）：量取10mL吐温-20，用磷酸盐缓冲溶液稀释至1000mL，混匀.3.2.610%丙三醇-甲醇溶液：量取1mL丙三醇，用甲醇稀释至10mL，混匀.3.2.7乙晴-甲醇溶液：量取50mL色谱纯乙睛，加入50mL色谱纯甲醇中，混匀. 3.2.80.5g/L碘溶液：称取0.1g碘，用20mL色谱纯甲醇溶解，用水稀释至200mL，混匀，用0.45m水相滤膜过滤.临用现配（仅碘柱后衍生法使用）.3.2.95mg/L三溴化毗啶溶液：称取5mg三澳化毗啶溶于1L水中，混匀.用0.45μm水相滤膜过滤.临用现配（仅澳柱后衍生法使用）.
3.3标准品
3.3.1AFB标准品（CHO，CAS号：1162-65-8）：纯度≥98%的标准品或其溶液.3.3.2AFB:标准品（CHOCAS号：7220-81-7）：纯度≥98%的标准品或其溶液.3.3.3AFG标准品（CHO，CAS号：1165-39-5）：纯度≥98%的标准品或其溶液. 3.3.4AFG标准品（CHOCAS号：7241-98-7)：纯度≥98%的标准品或其溶液.
3.4标准溶液配制
和废弃物存放装置.在整个试验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施. 警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行.该区域应避光（直射阳光）、具备相对独立的操作台3.4.1标准储备液（10.0μg/mL)：分别称取AFB、AFB、AFG和AFG;各1mg（精确至0.01mg），分别用乙晴溶解并转移至100mL容量瓶定容，于一18℃及以下避光保存，有效期12个月.临用前进行浓度校准，校准方法见附录A. 3.4.2混合标准中间液（1.00μg/mL）：准确吸取AFB:、AFB:、AFG：和AFG：标准储备液各1.00mL至10mL容量瓶中，乙晴定容至刻度，于一18C及以下避光保存，有效期12个月.3.4.3混合标准使用液（100ng/mL）：准确吸取混合标准中间液10.00mL至100mL容量瓶中，乙定容至刻度，临用现配. 3.4.4标准系列工作液：分别吸取混合标准使用液和混合标准中间液适量，用流动相配制成质量浓度分别为 0.200ng/mL、1.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的标准系列工作液.临用现配.
3.5材料
3.5.1玻璃纤维滤纸：孔径1.6μm，或相当者.3.5.2免疫亲和柱：柱容量≥200ng，回收率≥85%.3.5.3复合材料固相萃取柱（3g/5ml，以下简称固相萃取柱）：填料为碳-氧化铝、白炭黑复合材料.或3.5.4针式微孔滤膜：孔径0.45xm，有机型.或相当者. 相当者.
4仪器和设备
2
4.1液相色诺仪：配有荧光检测器.
4.2光化学柱后衍生器（适用于光化学柱后衍生法）. 4.3溶剂柱后衍生装置（适用于碘或溴试剂衍生法）.4.4电化学柱后衍生器（适用于电化学柱后衍生法）.4.5天平：感量分别为0.01mg和0.01 g-4.6匀浆机. 4.7高速粉碎机.4.8组织掐碎机.4.9涡旋振荡器：转速≥1000r/min.4.10涡旋混合器.4.12离心机，转速≥6000r/min， 4.11高速均质器：转速6500r/min~24000r/min.4.13氮吹仪.4.14 pH计.
5分析步骤
5.1试样制备与保存
5.1.1试样制备
检测用的样品量应大于1kg：当样品量不足1kg时，至少取同一批次的3个包装；缩分后取不低于0.5kg，其中，固体样品用高速粉碎机粉碎，半固体样品用组织捣碎机捣碎，液体样品用匀浆机匀浆.
注1：对于高油脂含量颗粒样品（如花生等）、柔韧性样品/高黏度样品（如饺子皮等）高糖样品（如葡萄干等）等特殊样品可以采取冷陈或加水匀浆（花生样品水一1：1.4其他样品按1：1或根据实际需要加水制备使试
样均匀）等措施进行制样.注2：对于碳酸饮料或酒类等，可采取超声、搅拌或抽真空等措施脱气后混匀.注3：根据检验目的可按实际情况取样制备.
5.1.2试样保存
制备后混合均匀的试样均分至约100g的多个包装，储存于洁净的容器内，密封后根据样品性质置于2C~6C或-18C以下避光保存
5.2试样提取
5.2.1固体试样和半固体试样
称取5g试样（精确至0.01g，玉米试样10g）于离心管中，加人20.0mL（玉米试样40ml，婴儿米粉等强吸水性试样25.0mL）乙晴-水溶液A（高蛋白含量试样乙晴-水溶液B），置于涡旋振荡器中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min（或玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用.
注：高油脂含量颗粒样品、柔韧性样品/高黏度样品、高糖样品等加水制备试样：称取10g试样（精确至0.01g-花生试样12g）于离心管中.加人25.0mL乙猜（花生试样33.0mL)，其他操作步骤同上.
5.2.2液体试样
油脂试样（植物油等）：称取5g试样（精确至0.01g）于离心管中，加人20.0mL乙-水溶液A.置于涡靛振荡器中振荡20min（或用均质器均质3min），在6000r/min下离心10min（或玻璃纤维滤纸过滤），取上清液备用.
