中华人民共和国国家标准
GB/T 35519-2017
化学品 稳定转染人雌激素受体 转录活性试验 雌激素激动活性法
Chemicals-Stably transfected human estrogen receptor transcriptionalactivation assayDetection of estrogenic agonists activation
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准与经济合作与发展组织（OECD）化学品测试方法No.455《Performance-BasedTestGuideline for Stably Transfected Transactivation In Vitro Assays to Detect Estrogen Receptor Ago-nists）（2012）技术性内容一致.
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251）提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、复旦大学.
本标准主要起草人：陈相、缪文彬、陈青、陈会明、张静、朱洪坤、赵颐晴、蒋伟、姚丽芳、清江、郭春华.
引言
本标准描述利用稳定转染的细胞系检测雌激素受体激动剂的体外转录激活试验方法包括原理和功能相似的雌激素受体（Estrogen receptor，ERs）激动剂，旨在促进类似的或者经改进的检测方法符合经济合作与发展组织关于危害评估新方法的验证和认可的指导规范.
系检测化学品雌激素活性的转录激活试验，附录B为利用能够表达人ERa的BG1Luc-4E2细胞进行的 本标准附录A和附录B已经经过验证.附录A为利用稳定转染人ERa的hERa-HeLa-9903细胞雌激素受体转录激活试验，本标准的雌激素受体转录激活试验方法可以在各国间使用，有利于数据互认.
定潜在的内分泌干扰物制定新的指导原则.经济合作与发展组织的测定、评估潜在内分泌干扰物质的 1998年经济合作与发展组织发起优先项目活动，旨在对现行指导原则进行修订，同时为筛选和测概念框架于2012年修订.念框架由5个阶段组成，不同阶段对应生物复杂性的不同阶段.本标准是第二阶段的体外试验，提供内分泌作用机制/通路信息”.本标准是鉴定雌激素受体激动剂的体外转录激活试验方法.
转录活性试验雌激素激动活性法 化学品稳定转染人雌激素受体
1范围
本标准规定了利用稳定转染细胞系检测雌激素受体激动剂的试验的术语和定义、试验原理、试验方法与步骤、数据和报告.
活性. 本标准适用于利用稳定转染细胞系检测雌激素受体激动剂的试验评估化学品类雌激素的生物
2术语、定义和缩略语
2.1术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
2.1.1
激动剂agonist
与特定受体结合时能产生某种反应（如转录）的物质.
2.1.2
拮抗剂antagonist
2.1.3
抗雎激素活性anti-estrogenic activity
一种化学品抑制173-雌二醇介导的雌激素受体作用的能力.
2.1.4
活性炭/葡聚糖处理charcoal/dextran treatment
细胞培养中的血浆处理方法，可以去除内源性激素和激素结合蛋白.
2.1.5
细胞毒性cytotoxicity
与平行的溶剂对照组相比，对细胞结构或功能产生毒害并最终导致细胞死亡的毒性效应，表现为毒物暴露后细胞数量减少或细胞功能减弱，
2.1.6
化学品模拟173-雌二醇结合和激活雌激素受体的能力.
2.1.7
评估一种试验方法在机制和功能方面是否与验证方法一致的标准.包括：
在验证方法中用来证明试验方法可行的最少的对照化学品清单； -基本的试验方法；
一以验证试验为标准，测试试验通过对照品验证其准确性和可靠性的水平.
2.1.8
稳定转染stable transfection
当DNA被转染到培养的细胞后，整合到细胞基因中，稳定的表达所转染的基因，形成的细胞克隆用稳定标志物进行筛选（如G418抗性）
2.1.9
响应特定化学信号（如雌激素与雌激素受体结合信号）的信使核糖核酸合成.
2.1.10对照品中阳性反应较弱的化学品，用于确保试验的准确性. 弱阳性对照 weak positive control
2.1.11溶剂对照 vehicle control; VC溶剂单独作为对照.
2.1.12 验收标准accceptability criteria
符合试验控制和参考标准的最低标准.
2.1.13准确性 accuracy试验结果与公认参考值的接近程度，衡量试验方法的效能和相关性.
2.1.14
参考标准
2.1.15
用于证明试验方法合适的对照品.
2.2缩略语
本标准所用缩略语见表1.
表1缩略语
缩略语 中文全称 英文全称STTA 稳定转染转录激活试验 Stably TransfectedTransactivation assayE2 173-二醇 17β-estradiolER 维激索受体 Estrogen ReceptorRLU 相对光单位 Relative Light UnitsHela 种永生的人宫颈细胞系 An immortal human cervical cell lineBG-1 永生腺癌细胞 一种能内源性表达雌激索受体 An immortalized adenocarcinoma cell that endogenously express estrogen receptorDMSO 二甲基亚码 Dimethyl sulfoxidehERa 人维激索受体a Human estrogen receptor alpha
